[发明专利]一种高效稳定的纤维素酶突变体

说明书

本发明涉及一种来源于大额牛瘤胃分离的高效稳定的纤维素酶突变体，属于基因工程领域，该高效稳定的纤维素酶突变体EP‑15的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，该纤维素酶突变体EP‑15编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的纤维素酶突变体EP‑15的最适温度从突变前（CMC‑1酶）的50℃降为45℃，更接近瘤胃的生理温度（40℃）；EP‑15最适pH为5.0。EP‑15和CMC‑1分别在温度40℃、45℃和50℃以及在pH4.5、pH5.0和pH5.5处理120min后，EP‑15酶仍能保持较强的热稳定性和pH稳定性，且酶活高于CMC‑1酶。EP‑15酶活力在45℃或pH 5.0时较CMC‑1酶约有2倍提高，具有一定的开发价值。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体的说，涉及一种高效稳定的纤维素酶突变体。

背景技术

大额牛终年散养，放牧在大山上，没有相应的科学饲养措施，能以竹子等其它反刍家畜所不能利用的饲料为主要食物，对竹子干物质消化率可达61％，大额牛是高效纤维分解酶筛选和发掘的珍贵种质资源之一。大额牛的瘤胃内存在大量未知的纤维降解菌，且这些纤维降解菌可能携带着丰富的功能新基因，能够分泌表达高效的纤维降解酶。筛选高效分解粗纤维的基因和酶并对其进行定向改造，如果能提高大额牛瘤胃中纤维素酶的活性或改善原有纤维素酶的特性，其结果不仅对大额牛的人工饲养及生物资源的开发具有重要的意义，而且对提高其他反刍动物利用粗饲料的能力和效率具有更重大的经济意义。

发明内容

本发明目的在于提供了一种高效稳定的纤维素酶突变体。本发明采用易错PCR对来源于大额牛瘤胃CMC-1基因进行了体外定向改造，获得了突变酶，其酶活、热稳定性和pH稳定性均明显提高，具有一定的开发价值。

为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15编码基因，用于编码所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15。所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还涉及包含所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15编码基因的重组表达载体和包含所述的高效稳定的纤维素酶突变体EP-15编码基因的表达菌株。

本发明还提供了一种纤维素酶突变体EP-3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

所述的纤维素酶突变体EP-3编码基因，用于编码所述的纤维素酶突变体EP-3。所述的纤维素酶突变体EP-3编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明还涉及包含所述的纤维素酶突变体EP-3编码基因的重组表达载体和包含所述的纤维素酶突变体EP-3编码基因的表达菌株。

本发明还提供了一种纤维素酶突变体EP-6，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

所述的纤维素酶突变体EP-6编码基因，用于编码所述的纤维素酶突变体EP-6。所述的纤维素酶突变体EP-6编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

本发明还涉及包含所述的纤维素酶突变体EP-6编码基因的重组表达载体和包含所述的纤维素酶突变体EP-6编码基因的表达菌株。

本发明还提供了一种纤维素酶突变体EP-7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

所述的纤维素酶突变体EP-7编码基因，用于编码所述的纤维素酶突变体EP-7。所述的纤维素酶突变体EP-7编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

本发明还涉及包含所述的纤维素酶突变体EP-7编码基因的重组表达载体和包含所述的纤维素酶突变体EP-7编码基因的表达菌株。