[发明专利]一种可特异性结合检测人附睾蛋白4的结合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种可特异性结合检测人附睾蛋白4的结合蛋白及其制备方法和应用，涉及抗体技术领域。具体而言，本发明公开的结合蛋白包含第一抗原结合结构域或第二抗原结合结构域，该第一抗原结合结构域包含至少一个互补决定区，第二抗原结合结构域与第一抗原结合结构域具有至少80％的序列同一性。该结合蛋白可特异性结合HE4，并具有较好的结合活性以及亲和力，能用于检测HE4或用于诊断与HE4相关的疾病。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种可特异性结合检测人附睾蛋白4的结合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

卵巢癌在妇科肿瘤中发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，而致死率却占据首位。这主要是因为卵巢深藏于腹腔之内，早期症状不明显，只有19％的卵巢癌患者在癌组织突破卵巢之前能够被发现，而大多数患者就诊时已处于晚期，并且容易腹腔转移及复发。卵巢癌如果早期治疗，其5年生存率可达92％，然而晚期的卵巢癌5年生存率不足50％。

早期卵巢癌的诊断方法有妇科检查、影像学检查、细胞学和组织学检测、肿瘤标志物等。妇科检查要发现盆腔可触及的异常，但需要有足够临床经验的医师。影像学诊断则包括超声、CT和阴道超声等方法，这些方法只能提示卵巢形态出现异常，需要细胞学和组织学检测配合进一步检查。

而肿瘤标志物--糖链抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)被广泛应用于卵巢癌的早期诊断，它的升高在Ⅰ期卵巢癌患者的检出率仅为50％，而在Ⅱ～Ⅳ期的检出率可高达90％～94％。但是CA125在某些良性疾病如子宫内膜异位症，盆腔炎等也会出现升高，且这种假阳性通过影像学不容易排除。所以，作为诊断早期卵巢癌的标志物，CA125的特异性还是不足的，迫切需要一种敏感性和特异性较强的标志物来辅助CA125提高卵巢癌的诊断水平。

随着研究的深入，发现在正常组织中，人附睾蛋白4(human epididymisprotein4，HE4)广泛表达于气管、唾液腺、肺组织、乳腺上皮细胞等，在肿瘤组织中，HE4在卵巢浆液性癌、子宫内膜癌、肺癌和间皮瘤等均有高表达。HE4是一种含有高度保守的WAP(Whey Acidic Proteins)结构域蛋白，该结构域含有由8个半胱氨酸组成的4个二硫键核心区域，长124个氨基酸，属于抗菌肽基因家族。

经研究发现，HE4在人体正常的卵巢组织中几乎没有表达，而在卵巢癌中，HE4的表达上调最为常见，在大多数非卵巢恶性肿瘤中的表达很少，甚至未见表达。HE4基因的过表达，使卵巢癌细胞增殖减弱，凋亡增强，侵袭减弱，肿瘤增长变慢，说明HE4能抑制卵巢癌细胞的增殖和转移，是抗肿瘤基因。由于HE4分子量小，可分泌入血，在正常卵巢组织不表达，健康人体的血清中HE4含量稳定，在卵巢癌组织高表达，血清HE4升高提示机体有卵巢肿瘤发病的可能，而HE4的表达独立于CA125的表达，单独检测优于CA125且联合检测可提高诊断能力，同时HE4水平在卵巢癌术后明显降低，可作为卵巢癌病情监测和疗效观察的指标，因此HE4可以作为一种有效的卵巢相关肿瘤的新型血清肿瘤标志物。

2008年，HE4被美国食品药品监督管理局(FDA)批准应用于卵巢癌的早期筛查及鉴别诊断，因此，实现对HE4快速、准确的检测，是实现早诊断、早治疗，提高卵巢癌患者治愈率、延长生存期和改善生存质量的前提和保障。

当前对HE4的检测以酶联免疫法(ELISA法)、化学发光等基于免疫学原理的方法为主，都需要对HE4具有高灵敏度、高特异性的单克隆抗体，目前国内用于检测HE4的单克隆抗体多来自于老鼠腹水，其抗体活性的亲和力差，无法很好地应用于检测HE4中。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种包括HE4抗原结合结构域的分离的结合蛋白、其制备方法和应用。该结合蛋白具有较好的结合活性以及亲和力，能够用于检测HE4或用于诊断与HE4表达异常的相关的疾病中，本申请为HE4的有效检测以及与HE4相关的疾病的诊断提供了更多选择。