[发明专利]一种快速定量水中大肠杆菌的方法

权利要求书

1.一种快速定量水中大肠杆菌的方法，其特征在于，将含大肠杆菌的待测样品稀释一定倍数后，采用紫外可见分光光度计测定待测样品在特定波长处的吸光度，根据建立的吸光度和大肠杆菌浓度之间的校正曲线或回归方程，计算得到待测样品中大肠杆菌的浓度。

2.根据权利要求1所述的快速定量水中大肠杆菌的方法，其特征在于，

(1)建立校正曲线或回归方程

配制一组不同浓度的大肠杆菌菌悬液，通过紫外可见分光光度计分别在波长220、260、280、300、350、400、450、500、550nm处测定其吸光度A，同时，用显微计数法将对应的每个浓度的菌悬液样品进行细胞精确计数，得到单位体积菌悬液中大肠杆菌浓度C；分别测定空白样品在波长220、260、280、300、350、400、450、500、550nm处的吸光度A_I，根据吸光度A-A_I和大肠杆菌浓度C绘制校正曲线，或线性回归得到对应波长处的回归方程；

(2)计算大肠杆菌的浓度

稀释含大肠杆菌的待测样品，使稀释后菌悬液中的大肠杆菌浓度在回归方程或校正曲线的线性范围内，在与步骤(1)相同的条件下，采用紫外可见分光光度计测定220、260、280、300、350、400、450、500、550nm中任一波长处稀释后菌悬液的吸光度，根据对应的校正曲线或回归方程计算得到待测样品中的大肠杆菌浓度。

3.根据权利要求2所述的快速定量水中大肠杆菌的方法，其特征在于，步骤(1)中所述校正曲线或回归方程的具体建立方法如下：

取一定量的大肠杆菌菌悬液，分别稀释1、1.25、2、3、10、12.5、20、33、100、125、200、333、1000倍，空白组加入灭菌的背景溶液，将稀释后不同浓度的菌悬液和空白组加入灭菌离心管中，每组3个平行样；通过紫外可见分光光度计分别测定每个浓度的大肠杆菌菌悬液在220、260、280、300、350、400、450、500、550nm波长处的吸光度，取平均值得到该浓度菌悬液的吸光度A，空白样品的吸光度A_I；同时，用显微计数法对各个浓度的菌悬液进行细胞精确计数，每个样品重复3次，取平均值得到大肠杆菌浓度C，在吸光度A-A_I和大肠杆菌浓度C之间建立校正曲线或回归方程。

4.根据权利要求3所述的快速定量水中大肠杆菌的方法，其特征在于，所述大肠杆菌菌悬液的制备按如下方法进行：

(1)培养基的配置：

按照说明配置营养肉汤培养基，并将培养基灭菌；

(2)大肠杆菌的培养：

将大肠杆菌工作菌种接种至灭菌营养肉汤培养基中，菌液接种量1％-2％，在37恒温振荡培养箱中培养至对数生长期，时间约为16-24h，转速150-170r/min；

(3)大肠杆菌菌悬液的制备：

在4℃条件下，以7000r/min离心10min，去除培养基，将大肠杆菌菌体沉淀振荡重悬于生理盐水或磷酸盐缓冲溶液中，之后再次离心，再次重悬，总共洗涤3次，最后重悬于生理盐水或磷酸盐缓冲溶液中即制成大肠杆菌菌悬液。