[发明专利]外泌体多组学标志物的定量检测方法

说明书

本发明提供了一种外泌体多组学标志物的定量检测方法，包括以下步骤：提供一包含外泌体的生物样本，所述外泌体包括位于表面的至少一种蛋白分子和位于内部的核酸分子；提供与每一种所述蛋白分子相应的特异性抗体；将每一种所述特异性抗体加入所述生物样本中，从而得到一混合液，其中，所述特异性抗体上标记有特定序列的DNA分子片段；去除所述混合液中游离的所述特异性抗体以及游离的所述DNA分子片段；提取标记有所述DNA分子片段的外泌体内的所述核酸分子以及所述DNA分子片段；以及对所提取的所述核酸分子以及所述DNA分子片段同时进行定量分析。本发明的定量检测方法能够同时检测外泌体表面的蛋白分子和内部的核酸分子。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种外泌体多组学标志物的定量检测方法。

背景技术

外泌体是由活的细胞持续大量分泌的一种30-150nm的双磷脂膜结构小囊泡，作为细胞间通信交流的载体携带来源于母细胞的蛋白、核酸、代谢小分子等特异性组分。鉴于外泌体的来源和作用，外泌体反映了所来源的细胞的内容物。由此可见，外泌体的内容物的提取和定量检测显得尤其重要。

然而，外泌体的准确定量仍然是一个重大挑战。目前对外泌体表面蛋白的检测主要是通过质谱和蛋白芯片(ELISA)的方法来进行定量分析。对外泌体携带的核酸分子如DNA、mRNA和miRNA，主要是通过测序、PCR和基因芯片等技术进行分析。然而，在这些方法中，如质谱、芯片和测序等技术不但成本昂贵，而且耗费大量时间和人力。

更进一步，对外泌体多组学标志物(如蛋白和核酸)的同时检测和分析，相比于单独检测蛋白质和核酸，可以获得更多维度的生物信息，这也正是外泌体相比于游离DNA的优势。目前，当需要对外泌体多组学标志物(如蛋白和核酸)进行检测时，对于同一份样本，通常必须分为几个组分，一部分用于分析表面蛋白，另一部分用于核酸检测。这种方法不仅成本高，时间长，而且对于样本量小的外泌体的多组学分析造成了很大的挑战。

发明内容

有鉴于此，有必要提供一种外泌体多组学标志物的定量检测方法，该定量检测方法能够同时检测外泌体表面的蛋白分子和内部的核酸分子。

本发明提供一种外泌体多组学标志物的定量检测方法，包括以下步骤：

提供一包含外泌体的生物样本，所述外泌体包括位于表面的至少一种蛋白分子和位于内部的核酸分子；

提供与每一种所述蛋白分子相应的特异性抗体；

将每一种所述特异性抗体加入所述生物样本中，使得所述外泌体表面的每一种所述蛋白分子与相应的所述特异性抗体结合，从而得到一混合液，其中，所述特异性抗体上标记有特定序列的DNA分子片段；

去除所述混合液中游离的所述特异性抗体以及游离的所述DNA分子片段，从而分离出标记有所述DNA分子片段的外泌体；

提取标记有所述DNA分子片段的外泌体内的所述核酸分子以及所述DNA分子片段；以及

对所提取的所述核酸分子以及所述DNA分子片段同时进行定量分析。

本发明的定量检测方法能够同时检测外泌体表面的蛋白分子和内部的核酸分子，该定量检测方法具有操作方便、成本低以及耗时短的优点。

附图说明

图1是本发明较佳实施例提供的外泌体多组学标志物的定量检测方法的流程图。

图2是本发明较佳实施例提供的外泌体的结构示意图。

图3是本发明较佳实施例提供的复合探针的合成示意图。

图4是图2中的外泌体与图3中的复合探针结合后的结构示意图。

图5是将图4中的标记有DNA分子片段的外泌体分离的过程以及原理示意图。