[发明专利]一种同时测定人参皂苷Rb1

说明书

本发明公开了一种利用高效液相色谱法同时测定人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃、Rb₁、Rc含量的方法，具体内容为色谱柱选用酰胺色谱柱；流动相为乙腈(B)和水(A)梯度洗脱，具体条件为0～30min，10～18％A；30～60min，18～15％A；柱温为30℃；检测波长为203nm；流速为1.0mL/min。本发明首次建立了同时测定人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃含量的方法，同时克服了现有技术由于无法将人参皂苷Rb₁和人参皂苷Ra₃、人参皂苷Rc和人参皂苷Ra₁分开导致测定结果偏高的缺点，能够快速、准确地同时测定人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃、Rb₁、Rc含量。

技术领域

本发明涉及采用HPLC法同时测定人参属植物及其相关制品中人参皂苷Ra₁、 Ra₂、Ra₃、Rb₁、Rc含量的方法，属于中医药领域的发明创造。

背景技术

人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rc、Rd为最早被发现的人参皂苷类化合物，在人参属植物化学成分及生物活性研究中一直占据着非常重要的位置。我国2015年版药典一部中的人参、西洋参、红参、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷、三七、三七三醇皂苷、三七总皂苷的含量测定项下测定的人参皂苷涉及到这些人参皂苷中的至少两种。另外2003年2月由当时的中华人民共和国卫生部发布的《保健食品检验与评价技术规范》中的《保健食品中人参皂甙高效液相色谱测定》中测定的是人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rc、Rd共6种人参皂苷。

除了上述法定的含量测定方法外关于人参属植物及其不同药用部位中人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rc、Rd含量测定的文献则多达几百篇，其中不论是何种人参皂苷的含量测定方法，绝大部分采用的是高效液相色谱法，而且固定相采用的是十八烷基硅烷键合硅胶(C-18或ODS)，流动相一般是乙腈 -水、甲醇-水或乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱。

人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃是人们发现人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃、 Rc、Rd之后不久发现的人参皂苷，极性大于上述人参皂苷。至今为止关于人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃的生物活性、含量测定等方面的研究几乎未见报道，这可能与这些皂苷分离纯化难度较大有关。尤其在含量测定方面近年来除了本发明人等【张佳音.人参中高级性人参皂苷类成分的研究[D].吉林大学，2017.】发表的采用Unitary-C18(4.6mm×250mm,5μm,100A)色谱柱，以乙腈-磷酸水溶液为流动相，在203nm波长下测定多种人参属植物中人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃的含量的测定方法外未见其他报道。本发明人接下来进行的关于上述人参皂苷Ra₁、 Ra₂、Ra₃的含量测定的进一步研究表明，因此不能用于人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃的准确定量分析。至于利用高效液相色谱法同时测定人参皂苷Ra₁、Ra₂、Ra₃、 Rb₁、Rc含量的方法更是未见报道。

发明内容