[发明专利]用于外源蛋白分泌的糖苷水解酶融合表达系统

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌融合表达系统，特征在于包含能够编码至少以下元件的DNA序列，所述元件包括信号肽、糖苷水解酶或其部分和外源蛋白，并且依上述顺序排列融合在一个开放读码框内。

2.权利要求1的融合表达系统，其中所述糖苷水解酶包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

3.权利要求1的融合表达系统，其中所述糖苷水解酶是一种同系物，其与含有如SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列的糖苷水解酶具有70％的氨基酸序列相似性。

4.权利要求1的融合表达系统，其中糖苷水解酶或其部分和外源蛋白之间具有接头序列、用于蛋白酶剪切的靶位点或内含肽插入。

5.使用权利要求1的融合表达系统分泌生产外源蛋白的方法，所述方法包括步骤：

(1)构建合适的枯草芽孢杆菌细胞，其包含能够编码至少以下元件的DNA序列，所述元件包括信号肽、糖苷水解酶或其部分和外源蛋白，并且依上述顺序排列融合在一个开放读码框内；

(2)在适于生长和分泌的条件下培养步骤(1)中所构建的细胞；和

(3)回收所述蛋白。

6.权利要求5的方法，其中步骤(3)包括使用固体纤维素例如再生无定形纤维素(Regenerated amorphous cellulose，RAC)回收所述蛋白。

7.权利要求5的方法，其中糖苷水解酶或其部分和外源蛋白之间具有内含肽序列，并且所述分泌生产外源蛋白的方法包括在合适的条件下断裂内含肽以释放外源蛋白。

8.权利要求5的方法，其中糖苷水解酶或其部分和外源蛋白之间具有用于蛋白酶剪切的靶位点，并且所述分泌生产外源蛋白的方法包括在所述靶位点切割融合蛋白。