[发明专利]甘薯四倍体野生种根直接再生为植株的方法

说明书

本发明公开了一种甘薯四倍体野生种根直接再生为植株的方法。所述方法先将甘薯四倍体野生种Ipomoea tabascana茎段置于MS培养基上培养生根后，截取整条根作为外植体接种于MS培养基上，在25±1℃、光照16小时/天的条件下培养7～10天，根前端区域开始膨大，并逐渐分化出芽，进而形成植株；待植株生长10～15天后再转入MS培养基上，光照16小时/天的条件下进行继代培养3～7天，最终获得完整再生植株。本发明能够将甘薯四倍体野生种Ipomoea tabascana一步诱导成苗，并且再生率高，达到90.0％，植株再生时间较短，普遍为20～30天。

技术领域

本发明属于植株再生方法技术领域，涉及一种甘薯四倍体野生种根直接再生为植株的方法。

背景技术

目前，栽培种甘薯(Ipomoea batatas L.(Lam)，六倍体)及少数野生种(二倍体)的再生方法多使用叶片、茎段、顶端分生组织等作为外植体，经愈伤形成再生植株。例如吴洁等剥离甘薯茎尖分生组织在含有2,4-D的MS培养上诱导胚性愈伤，再经悬浮培养40周以后转移至含有ABA的培养基上诱导植株再生(吴洁,郑雪莲,屈会娟,李明,阎文昭.高淀粉专用型甘薯品种悬浮体系的建立及植株再生[J].西南农业学报,2013,26(01):52-56.)。周志林等研究了商薯19的茎段、叶片、叶柄的再生能力，结果表明芽分化率只有50％左右(周志林,唐君,张允刚,赵冬兰.不同基因型甘薯愈伤组织诱导及植株再生[J].西北农业学报,2010,19(09):203-206.)。刘爱华等对野生种Ipomoea littoralis的再生研究表明，叶片、叶柄在含有2,4-D、KT的培养基上诱导出愈伤组织，然后转移到MS培养上可诱导成苗，植株再生率约50％(刘爱华,张志芬,徐丽娟,孟祥霞.甘薯近缘野生种Ipomoea littoralis Blune叶片、叶柄愈伤组织诱导及其植株再生[J].莱阳农学院学报,1999(01):44-46.)。上述方法普遍存在以下问题：培养条件较为复杂，需要多种培养基持续诱导；培养周期较长，通常需要半年以上的时间；再生效率低。

Ipomoea tabascana是栽培种甘薯亲缘关系较近的四倍体野生种之一，不能像甘薯一样形成块根。但是它在甘薯起源、进化过程中起到重要的作用。深入研究I.tabascana对甘薯研究有着重要作用。目前还没有其植株再生方面的研究报道。

发明内容

为了弥补甘薯四倍体野生种植株再生方法的空白，本发明提供一种甘薯四倍体野生种根直接再生为植株的方法，该方法培养条件简单，周期短，效率高。

本发明的技术方案是：

甘薯四倍体野生种根直接再生为植株的方法，包括以下步骤：

将甘薯四倍体野生种Ipomoea tabascana茎段置于MS培养基上培养1个月，截取整条根作为外植体接种于MS培养基上，在25±1℃、光照16小时/天的条件下培养7～10天，根前端区域开始膨大，并逐渐分化出芽，进而形成植株；待植株生长10～15天后，将其转入MS培养基上，光照16小时/天的条件下进行继代培养3～7天，获得完整再生植株。

在本发明的具体实施方式中，所述的茎段的长度为1～2cm。

在本发明的具体实施方式中，所述的MS培养基的组成包括MS基本培养基，蔗糖30g/L和Phytagel 7.0g/L；pH为5.8～6.0。

在本发明的具体实施方式中，所述的光照强度为2500Lux。

本发明方法能够将甘薯四倍体野生种Ipomoea tabascana一步诱导成苗，并且再生率高，达到90.0％，植株再生时间较短，普遍为20～30天。本发明方法可操作性强、重复性好。

附图说明

图1是Ipomoea tabascana的根前端部分开始膨大的实物图。

图2是Ipomoea tabascana的根膨大后开始分化出芽的实物图。