[发明专利]一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌及应用

权利要求书

1.一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum 1-1，其特征在于，该菌株已于2019年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019971。

2.权利要求1所述的一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌Leuconostoccitreum1-1，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。

3.权利要求1所述的一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum1-1的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)种子培养

将柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum 1-1划线至MRS固体培养基中，于30℃条件下静置培养直至出现单菌落；

(2)发酵培养

将MRS固体培养基中的单菌落划线至固体发酵培养基中，于30℃条件下静置培养直至出现单菌落；

挑取固体发酵培养基上正常生长的单菌落，接种到液体发酵培养基中，在温度为30℃的条件下，静置发酵1-2天，得到发酵液；

(3)制备酸性菊粉酶

吸取发酵液10mL，在4℃，10000r/min条件下，离心5min，弃去上清液，保留沉淀，向沉淀中加入0.2mol/L、pH 5.0的醋酸缓冲溶液400μL重悬沉淀，后加入100mg/ml的溶菌酶200μL，于30℃静置2h，再加入0.12g石英砂，随后在-30℃下高通量组织研磨器研磨240s，破胞结束后，在4℃、13000r/min条件下离心30min，取上清液，即为酸性菊粉酶。

4.权利要求3所述的一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum1-1的生产方法，其特征在于，

步骤(1)中所述的MRS固体培养基配方如下：

牛肉膏10g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温-80 1mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 6.6-6.8，121℃高压灭菌15min；

20％葡萄糖储备液：用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L，121℃高压灭菌20min；

使用时加入终浓度为2％的葡萄糖储备液。

步骤(2)中所述的固体发酵培养基配方如下：

牛肉膏10g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温-80 1mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 6.6-6.8，121℃高压灭菌15min；

20％菊糖储备液：用超纯水配制葡萄糖溶液200g/L，121℃高压灭菌20min，

步骤(2)中所述的液体发酵培养基配方如下：

牛肉膏10g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温-80 1mL，蒸馏水1000mL，pH 6.6-6.8，121℃高压灭菌15min；

20％菊糖储备液：用超纯水配制菊糖溶液200g/L，121℃高压灭菌20min；

使用时加入终浓度为2％的菊粉溶液。

5.权利要求1所述的一株用于生产酸性菊粉酶的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum1-1在生产菊粉酶中的应用。

6.权利要求3的方法生产得到的所述发酵液在降解果聚糖类物质中的应用。

7.权利要求3的方法生产得到的所述发酵液在降解菊粉中的应用。

8.权利要求3的方法生产得到的所述酸性菊粉酶在降解果聚糖类物质中的应用。

9.权利要求3的方法生产得到的所述酸性菊粉酶在降解菊粉中应用。

10.权利要求3的方法生产得到的所述酸性菊粉酶在高果糖浆生产中的应用。