[发明专利]超高效液相色谱分析阿德福韦酯N3-异构体的方法

说明书

本发明涉及超高效液相色谱分析阿德福韦酯中N3‑异构体的方法，包括：分析方法的色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)‑0.1％甲酸溶液(氨水调节pH值)(B)，梯度洗脱18％B(0min)～18％B(1min)～25％B(5min)～35％B(13min)～79％B(18min)；流速：0.5ml/min；检测波长272～276nm；柱温28～32℃。本发明提供一种检测阿德福韦酯中N3‑异构体的超高效液相色谱含量测定的方法。根据本发明所建立的检测阿德福韦酯中N3‑异构体的超高效液相色谱含量测定方法灵敏度高，分离度和重现性好；所获得的含量测定方法能完全的区分阿德福韦酯及其N3‑异构体并准确测定阿德福韦酯N3‑异构体的含量，且该色谱体系亦可直接用于LC‑MS的分析，可同步对N3‑阿德福韦酯异构体进行分子量的监测。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种检测阿德福韦酯中N3-异构体超高效液相色谱分析方法。

背景技术

乙肝病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的传染性疾病，严重威胁我国人民肝脏健康，目前我国慢性乙肝患者约2000～3000万，临床有效抗乙肝病毒药物主要为干扰素和核苷(酸)类似物(NAs)。目前我国主要应用的核苷(酸)类似物(NAs)有拉米夫定、恩替卡韦、替比夫定、阿德福韦酯等。

阿德福韦酯为阿德福韦的前体，在体内水解为阿德福韦转运进入细胞，并在细胞激酶的作用下，二次磷酸化转化为活性代谢物二磷酸阿德福韦，抑制病毒DNA聚合酶和逆转录酶起到抗病毒的作用。阿德福韦酯耐药发生率低、发生耐药时间晚、长期用药安全，不与拉米夫定发生交叉耐药，故适合于需长期用药或已发生拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者。

阿德福韦酯分子结构中腺嘌呤环的9位仲氨基氢可发生共振位移，得到同分异构体杂质，其中N3-异构体是其中最可能存在的异构体杂质。阿德福韦酯的同分异构体杂质理化性质可能与主成分比较接近，后续工艺步骤对其清除能力相对其他杂质可能比较有限，在阿德福韦酯成品中残留的可能性也较大。因此控制该异构体杂质的含量非常重要。

超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)的理论及原理与高效液相色谱(HPLC)相同，但比HPLC更能实现小颗粒填料、更低系统体积及更快速检测，增加了分析的灵敏度及色谱峰容量。

目前暂无阿德福韦酯中N3-异构体专项检测技术，《中国药典》项下阿德福韦酯质量标准仅收载了反相色谱法的有关物质检项，并不能准确控制N3-阿德福韦酯异构体，且目前检测同分异构体的方法一般都是无机缓冲盐，普通HPLC体系，分离效果不佳，且相对于UPLC耗时更长。因此，建立可靠快捷的测定阿德福韦酯中N3-异构体的方法，为进一步控制阿德福韦酯的质量以确保其制剂的临床使用安全非常有必要。

发明内容

本发明提出一种超高效液相色谱分析阿德福韦酯中N3-异构体的方法，包括以下步骤：

1)将样品溶液注入超高效液相色谱仪中，获得色谱图，采用如下色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(氨水调节pH值)(B)，梯度洗脱18％B(0min)～18％B(1min)～25％B(5min)～35％B(13min)～79％B(18min)；流速：0.5ml/min；

检测波长272～276nm；柱温28～32℃。

5.作为优选，色谱柱采用规格为1.7μm，2.1×50mm的Waters Acquity UPLC色谱柱。

更优选地，流速为0.5ml/min；检测波长274nm；柱温30℃。

2)利用对照品溶液的浓度和峰面积的确定标准曲线，用上述相同的方式获得一个待评价样品的峰面积；