[发明专利]一种阳离子氨基脂质及其合成方法与应用

说明书

一种阳离子氨基脂质及其合成方法与应用，属于细胞转染领域。所述阳离子氨基脂质结构如下：。本发明合成反应条件温和，溶剂选择性大，大大降低了反应的难度，提高了产率，且原料简单，便宜，大大降低了生成成本。本发明所述阳离子氨基脂质分子具有高效低毒的特点，可以在血清中达到很好的效果，大大简化了转染的操作步骤。

技术领域

本发明属于细胞转染领域，具体涉及一种阳离子氨基脂质及其合成方法与应用。

背景技术

在目前所有类型的非病毒转染试剂中，基于脂质体的转染试剂是公认最为有效的一种。这是因为脂质体转染试剂简单易用，且往往具有很高的效率。脂质体是人工制备的具有双分子层结构的球形囊泡，它可以与其它双分子层，如细胞膜等融合，从而将其包裹的分子从细胞膜外传送至细胞内部。由于其独特的性能，脂质体被广泛用于药物传送。脂质体既可携带亲水分子，也可携带疏水分子，它可以很好的与生物活性分子结合，如各种药物、核酸、多肽等，并且可将这些物质传送至细胞内以调控细胞的状态。这为治疗疾病提供了一种新的方式。

阳离子脂质体可与带负电荷的核酸(DNA)结合，并将其从细胞外送入细胞核内，使DNA在细胞核内表达，从而调控细胞的生长。这在生命科学相关的研究中具有至关重要的作用，同时也作为“基因治疗”的一种方式，具有广阔的应用前景。迄今为止，存在一些商业化的阳离子脂质体，但高效低毒性的阳离子脂质体数量依然很有限。

目前脂质体转染试剂存在的主要问题如下：

1.适用范围有限。许多细胞系，尤其是初级细胞如干细胞等，绝大部分现有的脂质体试剂都无法有效的转染。

2.合成复杂，价格昂贵。由于目前主流的脂质体转染试剂往往具有极为复杂的结构，其生产和研发成本都较高，导致脂质体转染试剂的价格居高不下，这大大限制了脂质体转染试剂的应用范围。

因此，市场对高效而廉价的脂质体转染试剂具有巨大的需求。

发明内容

解决的技术问题：针对上述技术问题，本发明提供一种阳离子氨基脂质及其合成方法与应用，所述阳离子氨基脂质转染细胞具备低毒高效的特点，可以在血清中达到很好的效果，大大简化了转染的操作步骤。

技术方案：一种阳离子氨基脂质，所述阳离子氨基脂质的结构式如式(I)所示，

合成上述阳离子氨基脂质的方法，包括以下步骤：

步骤一.将炔丙胺和十二烷基硫醇以1:(1.5-2)的摩尔比加入四氢呋喃或二氯甲烷(DCM)溶液中，最终反应物总量的溶液浓度为30～500mg/mL，再加入自由基光引发剂，加入量为反应物总质量的1％～5％，通氮气除氧后置于紫外光下光照1～3h；

步骤二.将丙烯酸二甲氨基乙酯加入步骤一反应完的溶液中，丙烯酸二甲氨基乙酯与炔丙胺的摩尔比为(1～2):1，再加入碱性物质，碱性物质与炔丙胺的摩尔比为1:(10～50)，反应过夜得到最终产物阳离子氨基脂质。

作为优选，所述步骤一中自由基光引发剂为安息香二甲醚。

作为优选，所述步骤一中紫外光波长为250～365nm，强度为0.5～3mW/cm。

作为优选，所述步骤二中碱性物质为三乙胺或1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯。

上述的阳离子氨基脂质在制备脂质颗粒(即脂质体)中的应用。

作为优选，所述脂质颗粒含有生物活性剂siRNA、质粒、miRNA或mRNA。

上述的阳离子氨基脂质在制备细胞转染试剂盒中的应用。

有益效果：(1)本发明所述方法反应条件温和，溶剂选择性大，大大降低了反应的难度，提高了产率，并且原料简单、便宜，大大降低了生成成本；