[发明专利]一种高灵敏度的D-二聚体检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开一种高灵敏度的D‑二聚体检测试剂盒及其使用方法，试剂盒包括试剂盒主体、密封盖、保护盖、试剂，试剂盒主体上依次设有固相载体孔、样本孔、检测抗体孔、荧光素孔、洗涤孔、读数孔，试剂盒包含了完成免疫检测所需要的全部试剂，试剂盒里装载的固相载体的端部包被了捕获抗体，通过固相载体浸入试剂盒内的各个孔，即可以完成被测样本中目标抗原的结合以及后续检测步骤，极大降低了制造和维护的成本；本发明固相载体表面覆有具有生物相容性的多糖复合物，多糖复合物可与蛋白质分子形成氢键弱相互作用，有效增强特异性的免疫信号。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种高灵敏度的D-二聚体检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块，是纤维蛋白单体经活化因子XIIIa交联后再经纤溶酶水解产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。

在生理状态下，机体保持着凝血与纤溶动态平衡，以保证纤维蛋白及时形成和清除，而人体正常D-二聚体的水平一般在200μg/l以下，如果体内凝血和纤溶系统双重激活，D-二聚体水平就会升高，因此D-二聚体可以作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一，D-二聚体的特异性反映的是有凝血和纤溶过程的这一类疾病的共同病理特点，因此在临床应用十分广泛。D-二聚体作为测定纤溶系统的主要因子，对于诊断与治疗纤溶系统疾病及与纤溶系统有关的疾病以及溶栓治疗检测有着重要的意义，因此D-二聚体是深静脉血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，弥散性血管内凝血(DIC)的关键指标。由此可见，血液中D-二聚体含量测定对血栓性疾病的早期诊断、病程监测以及对溶栓药物的治疗监测等都具有重要的临床意义。

目前，针对D-二聚体的检测方法主要有胶乳凝集法，双抗夹心法(ELISA)、免疫金标法、胶乳颗粒增强免疫比浊法等。乳胶凝集法简单快速，适用于即时检验(POCT)，但是只能用于定性测定，大多用于筛查；ELISA法灵敏度高，但定量准确性差、操作时间长、自动化程低，不适合POCT的需要；胶乳颗粒增强免疫比浊法可以很方便的应用于全自动生化仪，但是需要仪器，耗时较长，适合处理大量样本，对于急诊科和基层医院，无法满足快速检测的目的；免疫金标法与乳胶凝集法类似，具有操作简单快速的优点，但是同样定量准确性差，特别是重复性差这一缺点限制了其在临床上的应用，尤其不适用于需通过准确定量来帮助对疾病进行诊断的体液标志蛋白的定量检测。因此开发定量准确、快捷方便的D二聚体检测产品，仍是临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏度的D-二聚体检测试剂盒及其使用方法，检测的灵敏度高，线性良好。

为实现上述目的，本发明的技术方案提供一种高灵敏度的D-二聚体检测试剂盒，包括试剂盒主体、密封盖、保护盖、试剂，试剂盒主体上依次设有固相载体孔、样本孔、检测抗体孔、荧光素孔、洗涤孔、读数孔，所述固相载体孔内部为T形结构，固相载体孔上方设有保护盖，保护盖与固相载体孔通过铰接相连，固相载体孔内设有固相载体，所述样本孔内装有血清样本，所述检测抗体孔内装有生物素标记的检测抗体，所述荧光素孔内装有荧光素标记的链霉亲和素，所述洗涤孔共有8个，洗涤孔内装有洗涤缓冲液，所述读数孔的底部透明，所述密封盖完全覆盖样本孔、检测抗体孔、荧光素孔、洗涤孔、读数孔的孔口。

优选的，所述固相载体为石英针。

优选的，所述保护盖为保护铝箔。

优选的，所述固相载体的下端部涂覆有多糖复合物，多糖复合物为含质量分数0.5～2.5％壳聚糖、0.1～0.5％甘油，0.5～1.5％聚乙二醇1000的去离子水溶液。

优选的，所述洗涤缓冲液为含0.15～0.35M的NaCl、0.05～0.1％vol的曲拉通X-100、3～6g/L的十二烷基肌氨酸钠的PBS缓冲液(0.01M，pH7.4)。