[发明专利]基于MECP2基因的非治疗目的的将病毒注入动物特定脑区进行基因编辑的方法

说明书

本发明公开了一种基于MECP2基因的非治疗目的的将病毒注入动物特定脑区进行基因编辑的方法，利用脑立体定位注射泵将病毒直接注射入非人灵长类动物的特定脑区域中；注射量为每1m³注射病毒1uL，注射病毒的滴度为10*10¹³vg/mL。该方法直接将病毒注入非人灵长类动物的特定脑区域进行基因编辑，可以短时间内获得具有该疾病表型的转基因猴模型，解决现阶段迫切的孤独症谱系障碍(ASD)疾病研究需求。

技术领域

本发明属于非人灵长类动物的转基因技术及建模领域，具体涉及一种基于 MECP2基因的非治疗目的的将病毒注入非人灵长类动物特定脑区进行基因编辑从而构建非人灵长类动物ASD疾病模型的方法。

背景技术

孤独症谱系障碍(Autism Spectrum Disorder，ASD)其特征是患者出现类似自闭症的行为、运动控制能力的丧失、呼吸不规律以及骨骼问题。罹患ASD类疾病的少年儿童无法参与正常的被教育过程，从而对其成年后正常融入社会并发挥社会功能产生巨大影响。目前对ASD类疾病尚没有任何有效的治疗方法，因此ASD对家庭幸福、社会和谐发展都有严重的负面影响，目前已经得到社会各界的广泛重视。

近年来ADS患病率不断攀升已然成为危害青少年精神健康的首位疾病。国内ASD患病率尚待公布，但是即使患病率小于百分之一，中国的ASD患者也将逾数百万。当前ASD的发病机制并不完全清楚，但已有充分的证据表明，遗传因素是该病的重要风险因子：已有ASD患儿的家庭，新生儿的ASD发病风险较其他普通的家庭高出10倍，同卵双胞胎的共患病率高达70％-90％。此外多种单基因遗传病的患者也表现出ASD的核心症状，提示遗传突变会导致ASD 核心症状的出现。既然ASD是一种高度遗传的疾病，那么利用易感基因构建疾病模型对于探究该病的发病机制显得尤为重要。

目前，仅有少数针对于猕猴的胚胎ASD猕猴模型，但是(1)猕猴的个体间遗传背景差异大，加之胚胎转基因技术嵌合体问题无法解决，因此这些基于胚胎转基因的猕猴目前还很难帮助我们去观察和研究ASD的病因及发病机制。(2)而猕猴自然性成熟时间是5-6年，妊娠期需要6个月，属单胎生殖动物，因此利用转基因猕猴交配得到纯合子的基因操作猴现阶段还很难实现。(3)基于胚胎转基因技术的转基因猴死亡率高、成功率低、转入基因保留的稳定性差、发病时间极长，目前很难建立稳定的转基因猴模型。即使建立成功，此种猴的模型很难大量繁殖且维护成本极高而难于满足现阶段迫切的研究需求。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于MECP2基因的非治疗目的的将病毒注入非人灵长类动物特定脑区进行基因编辑的方法。

本发明所采用的技术方案：一种基于MECP2基因的非治疗目的的将病毒注入非人灵长类动物特定脑区进行基因编辑的方法，用微量注射器将病毒直接注射入非人灵长类动物的特定脑区中；注射量为每1m³注射病毒1uL，注射病毒的滴度为10*10¹³vg/mL。

进一步地，上述非人灵长类动物为猕猴或食蟹猴；所述非人灵长类动物的特定脑区域为海马脑区。所述可表达靶向猕猴MECP2基因的sgRNA如序列表中所示。

进一步地，上述病毒以600～800nL/min的速度进行注射，注射后留针 10～15min。所述病毒为腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)。

进一步地，上述微量注射器放置在立体定位仪的注射泵上，在MRI的定位指导下利用多点阵列注射法进行注射。

本发明具有以下显著特点：有效避免猕猴个体间的遗传差异和胚胎转基因技术嵌合体问题，以及传统胚胎转基因技术的死亡率高、成功率低、转入基因保留的稳定性差，成模时间长等不足。直接将外源基因注入非人灵长类动物的特定脑区域，可以短时间内获得转基因猴模型，解决现阶段迫切的ASD(孤独症谱系障碍)疾病研究需求。

附图说明