[发明专利]一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法

说明书

本发明公开了一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法，包括以下步骤：(1)向血清或血浆样本中加入内标工作液，混匀后静置，加入甲醇沉淀蛋白，再加入水调整有机相与水相的体积比为1:2，离心，获得预处理样本；(2)将固相萃取板孔进行活化处理，向活化处理后的固相萃取板孔中加入步骤(1)预处理后的样本，然后依次用淋洗液和洗脱液进行处理，采用收集板收集洗脱液处理后的馏分，再向收集板孔内加入水，涡旋混匀，封膜。采用本发明的萃取方法可以将包含整个类固醇激素代谢路径的19种类固醇激素，经过一次固相萃取处理即可同时获得。

技术领域

本发明涉及类固醇激素固相萃取技术领域，具体涉及一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法。

背景技术

人体内类固醇激素可分为肾上腺皮质激素和性激素，类固醇激素是脂溶性激素，由胆固醇经一系列酶催化代谢产生，它们在结构上都是环戊烷多氢菲衍生物。类固醇激素分为肾上腺皮质激素和性激素。肾上腺皮质激素包括盐皮质激素和糖皮质激素；性激素包括孕激素、雄激素和雌激素。类固醇激素通过内分泌系统调节人体新陈代谢，对机体生长、发育、生殖及维持体内环境稳定等方面起着重要的作用。

类固醇激素检测可用于下丘脑-垂体-肾上腺轴和下丘脑-垂体-性腺轴代谢相关疾病的筛查、诊断、鉴别诊断和治疗监测，相关疾病包括肾上腺皮质增生症、肾上皮质功能减退、继发性高血压(原发性醛固酮增多症、库欣综合征等)、多囊卵巢综合征、性发育异常、性功能减退、肥胖、矮小症等。

固相萃取(SPE)是一种液相色谱分离方法，其利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物和干扰化合物分离，达到分离和富集目标化合物的目的。类固醇激素在人体内含量低，含量跨度范围大，从ng级到pg级均有分布，而且结构相似物多，甚至有同分异构体存在；再加之血清或血浆的基质复杂，因此，很难同时将类固醇激素从血清或血浆中高效准确地提取出来。目前很少见有利用固相萃取法从血清或血浆中提取类固醇激素的报道；而且现有报道的类固醇激素的提取方法也不能完整的包含整个类固醇激素代谢路径的主要激素。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法。采用本发明的萃取方法可以将包含整个类固醇激素代谢路径的19种类固醇激素，经过一次固相萃取处理即可同时获得。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法，包括以下步骤：

(1)向血清或血浆样本中加入内标工作液，混匀后静置，加入甲醇沉淀蛋白，再加入水调整有机相与水相的体积比，离心，获得预处理样本；

(2)对固相萃取板孔进行活化处理，向活化处理后的固相萃取板孔中加入步骤(1)预处理后的样本，然后依次用淋洗液和洗脱液进行处理，采用收集板收集洗脱液处理后的馏分，再向收集板孔内加入水，涡旋混匀，封膜，即萃取得到类固醇激素。

优选的，步骤(1)中，所述内标工作液由碳代或氘代类固醇激素与水配制而成。

优选的，步骤(1)中，所述血清或血浆样本与内标工作液加入的体积比为10：(0.5-1.5)；更优选为10:1。

优选的，步骤(1)中，所述血清或血浆样本与甲醇加入的体积比为1:(0.8-2)；更优选为1:1。

优选的，步骤(1)中，调整有机相与水相的体积比为1:2。

优选的，步骤(1)中，所述离心的条件为：4℃、12000rpm-13000rpm、5min-15min。

优选的，步骤(2)中，所述活化处理的方法为：依次采用甲醇、超纯水对固相萃取板孔进行活化处理。

优选的，步骤(2)中，所述淋洗液处理具体为：将第一淋洗液和第二淋洗液依次加入到固相萃取板孔；其中，第一淋洗液是由水和乙腈按体积比9:1配制而成；第二淋洗液为正己烷。