[发明专利]一种梨耐盐砧木的周年繁育方法

权利要求书

1.一种梨耐盐砧木的周年繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)初代培养：

从枝条顶部剪取20厘米梨耐盐株当年生枝条，去除叶片，留取0.5厘米长叶柄，将枝条剪成带一个叶柄的单腋芽茎段，消毒，将其接种到诱导培养基上培养无菌芽；

(2)筛选培养：

将步骤(1)获得的无菌芽苗接入继代培养基中进行继代培养，诱导丛生芽，将丛生芽切成单株芽，依次接入筛选培养基中进行筛选培养：MS+1.5mg·L^-16-BA+0.4mg·L^-1IBA+2～6g·L^-1NaCl+20g·L^-1蔗糖+6g·L^-1琼脂，再进行组培扩繁5代获得耐盐无菌苗，该部分无菌苗作为梨耐盐株周年繁育的起始种苗；

(3)增殖及生根培养：

步骤(2)得到的起始种苗在MS+1.5mg·L^-1 6-BA+0.4mg·L^-1IBA+6g·L^-1NaCl+20g·L^-1蔗糖+6g·L^-1琼脂培养基和MS+1.5mg·L^-1 6-BA+0.4mg·L^-1IBA+20g·L^-1蔗糖+6g·L^-1琼脂培养基中交替增殖培养2次以上，培养基pH＝5.8，培养温度24～26℃，光照强度为2000勒克斯，光照时间14小时/天；

增殖培养结束后，选取增殖培养最终中生长在MS+1.5mg·L^-1 6-BA+0.4mg·L^-1IBA+6g·L^-1NaCl+20g·L^-1蔗糖+6g·L^-1琼脂培养基内的丛生芽进行生根培养，选取2厘米以上的无菌芽苗，剪去多余叶片，保留带顶芽和两个叶片的茎段，转接入生根培养基进行生根培养；

(4)炼苗培养：

生根培养30天后，置于培养室自然光下打开培养瓶瓶口练苗5～7天，然后取出幼苗，洗净根部培养基，多菌灵浸根，移入东北黑土：美乐棵营养土＝1:1的聚丙烯育苗袋基质，所述聚丙烯育苗袋基质中NaCl的含量为6g·kg^-1，缓苗培养15天后用6g·L^-1NaCl溶液浇灌，每隔10天施用一次，每月补充浇灌美乐棵营养液1次，培养120天后得到梨耐盐砧木。

2.根据权利要求1所述的梨耐盐砧木的周年繁育方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的梨耐盐株的筛选方法如下：将梨种子撒播在高盐土壤中，所述的高盐土壤是预先按照6g·kg^-1加入NaCl搅拌均匀、并用质量分数为0.6％的NaCl溶液浇透的土壤，出苗后每隔7天浇质量分数为0.6％NaCl溶液一次，生长期间除定期浇灌质量分数为0.6％的NaCl溶液，每月补充浇灌美乐棵营养液1次，两个自然年后仍存活并正常生长的单株为梨耐盐株。

3.根据权利要求1所述的梨耐盐砧木的周年繁育方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的诱导培养基的配方为：MS+0.2mg·L^-1 6-BA+20g·L^-1蔗糖+6g·L^-1琼脂，培养基pH＝5.8。

4.根据权利要求1所述的梨耐盐砧木的周年繁育方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的消毒按照如下方法进行：

用75％乙醇消毒30秒，再用0.1％HgCl₂灭菌15分钟，无菌水冲洗5～6遍。

5.根据权利要求1所述的梨耐盐砧木的周年繁育方法，其特征在于，步骤(1)中，培养条件如下：

培养温度23～27℃，光照强度2000勒克斯，光照时间14小时/天。