[发明专利]一种无扩增的核酸分子检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种无扩增的核酸分子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

表面标记有捕获分子的编码微球、检测分子和杂交缓冲液；

所述捕获分子为与目标核酸分子互补配对的核苷酸链或肽核酸分子；

所述检测分子为偶联有催化剂、并且与目标核酸分子互补配对的单核苷酸或核苷酸链。

2.根据权利要求1所述的核酸分子检测试剂盒，其特征在于，所述编码微球为至少两种发光材料编码的微球；

优选地，所述发光材料选自有机荧光分子、无机荧光分子或量子点中的任意一种或两种以上的组合；

优选地，所述微球中包含磁性纳米颗粒；

优选地，所述编码微球的表面经过化学修饰。

3.根据权利要求1或2所述的核酸分子检测试剂盒，其特征在于，所述编码微球的制备方法包括如下步骤：

将至少两种发光材料和微球混合在高分子材料中，通过多重耦合的物理场将高分子溶液分散在水相中形成均一的液滴，之后通过交联聚合反应将发光材料与磁性纳米颗粒包裹在所述液滴中得到所述编码微球。

4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸分子检测试剂盒，其特征在于，所述催化剂选自半乳糖苷酶、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶中的任意一种或两种以上的组合；

优选地，所述杂交缓冲液包括摩尔浓度为20-80mM的柠檬酸钠和500-800mM的氯化钠；

优选地，所述杂交缓冲液的pH为6.8-7.4；

优选地，所述核酸分子检测试剂盒还包括微孔板芯片；

优选地，所述微孔板芯片上单个微孔的体积为(20-100)×10^-15L。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的核酸分子检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将含有目标核酸分子的样品、表面标记有捕获分子的编码微球、检测分子和杂交缓冲液混合，得到复合微球和/或未与目标分子结合的微球；

(2)将所述复合微球和/或未与目标分子结合的微球导入微孔板芯片中反应，而后施加外界刺激检测编码信号并分析，得到目标分子的检测结果。

6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，步骤(1)中所述混合于无扩增核酸分子诊断设备中进行；

优选地，所述表面标记有捕获分子的编码微球结合一个或不结合所述目标核酸分子，所述微孔板芯片上单个微孔中含有一个或不含所述复合微球和/或未与目标分子结合的微球；

优选地，所述复合微球为与目标分子和检测分子结合的表面标记有捕获分子的编码微球。

7.根据权利要求5或6所述的使用方法，其特征在于，步骤(2)中将所述复合微球导入所述微孔板芯片的方法选自重力沉降、磁力沉降或电场诱导沉降中的任意一种或两种以上的组合；

优选地，步骤(2)中所述施加外界刺激的方法为使用至少两种波长的荧光进行近场激发。

8.根据权利要求5-7任一项所述的使用方法，其特征在于，所述无扩增核酸分子诊断设备包括基于微球的样品处理部分和基于微孔板的检测部分；

优选地，所述基于微球的样品处理部分包括样品提取模块、液体转移模块、混合模块、磁吸模块、液体预存模块和液路清洗模块；

优选地，所述基于微孔板的检测部分包括液路控制模块、多色荧光激发模块、前散射成像模块、荧光发射滤光模块、磁吸模块和交变电场控制模块。

9.根据权利要求5-8任一项所述的使用方法，其特征在于，所述无扩增核酸分子诊断设备还包括图像自动识别分析模块，所述图像自动识别分析模块识别所述微孔板芯片中微孔的亮度。

10.根据权利要求5-9任一项所述的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括如下步骤：

(1)在无扩增核酸分子诊断设备的混合模块将含有目标分子的样品、表面标记有捕获分子的编码微球、检测分子和杂交缓冲液混合，所述表面标记有捕获分子的编码微球结合一个或不结合所述目标核酸分子，得到复合微球和/或未与目标分子结合的微球；

(2)将所述复合微球和/或未与目标分子结合的微球通过电场诱导沉降的方法导入所述微孔板芯片中，所述微孔板芯片上单个微孔中含有一个或不含所述复合微球/或未与目标分子结合的编码微球，反应后使用至少两种波长的荧光进行近场激发，检测所述复合微球/或未与目标分子结合的编码微球的编码信号并利用无扩增核酸分子诊断设备的分析模块进行分析，得到目标分子的检测结果。