[发明专利]一种带有粘性末端的长链DNA及制备方法

权利要求书

1.带有粘性末端的双链线性DNA前引物或后引物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

（1）取2条摩尔数相同的DNA单链，通过退火进行双链碱基互补配对；

第一条DNA单链由30-105个核苷酸组成，第二条DNA单链由15-105个核苷酸组成；每条DNA单链由第一部分和第二部分组成：

第一条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的20-30个核苷酸，作为后续反应的前引物的粘性末端序列；

第二条DNA单链的第一部分为DNA单链3’端的5-30个核苷酸，作为长链DNA的粘性末端序列；

第一条DNA单链的第二部分核苷酸序列与第二条DNA单链的第二部分核苷酸序列的核苷酸数相等且反向互补配对；

（2）将步骤（1）获得的产物与补骨脂素按摩尔比为1：10-100的比例，混合，在照射能量为1~6J的条件下紫外照射，获得带有粘性末端的双链线性DNA前引物或后引物。

2.带有粘性末端的长链DNA的制备方法，其特征是包括如下步骤：

向EP管中加入权利要求1所述带有粘性末端的双链线性DNA前引物和后引物，使两者终浓度相等且为0.1-2.0 µM，目标DNA序列，使终浓度为0.1-3 ng/µl，和1╳DNA聚合酶，最后使用去离子水补齐50 µl体系，置于PCR仪中，进行PCR扩增，得到带有粘性末端的长链DNA。