[发明专利]辣椒疫霉菌PcMPK12基因及其载体与应用

说明书

本发明公开了一种辣椒疫霉菌PcMPK12基因及其载体与应用，所述辣椒疫霉菌PcMPK12基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示及其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；本发明首次克隆辣椒疫霉菌的促有丝分裂原蛋白激酶PcMPK12基因，并构建得到了瞬时过表达载体及沉默载体；利用农杆菌介导的瞬时表达系统及沉默载体初步探究PcMPK12基因生物学功能，结果显示辣椒疫霉菌PcMPK12基因促进病原物侵染，在致病进程中扮演正调控角色；沉默载体可降低辣椒疫霉菌的生长发育，降低辣椒疫霉菌的致病性。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种辣椒疫霉菌促有丝分裂原蛋白激酶PcMPK12基因及其载体与应用。

背景技术

辣椒疫霉(Phytophthora capsici)是一种存在范围比较广且破坏力强大的植物病原菌，能够侵染多种寄主植物。辣椒疫霉菌通常以卵孢子在土壤中或病残体中进行越冬，借助风、水及其他农事活动传播病害。由辣椒疫霉菌侵染辣椒引起的辣椒疫病，在美国、加拿大、韩国及我国等国家和地区严重发生，均造成不同程度的经济损失，这也迫使有效防治此病的发生成为目前的主要任务。由于辣椒疫病的抗病育种工作进展较为缓慢，现阶段对病害的预防和控制主要依靠化学防治，化学药剂的大量使用使得疫霉菌的抗药性不断提高，并且造成农药残留和环境污染。因此，寻找辣椒疫霉菌的关键致病基因及其致病机制成为近年来的研究热点。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种辣椒疫霉菌促有丝分裂原蛋白激酶PcMPK12基因及其载体与应用。

本发明是这样实现的：

本发明目的之一在于提供一种辣椒疫霉菌PcMPK12基因，其核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示。

本发明的目的之二在于提供所述辣椒疫霉菌PcMPK12基因所编码的辣椒疫霉菌PcMPK12蛋白，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的目的之三在于提供一种包含所述的辣椒疫霉菌PcMPK12基因的重组载体。

优选地，所述的重组载体以pBINGFP2表达载体为出发载体，将所述的辣椒疫霉菌PcMPK12基因插入pBINGFP2表达载体的BamHI和HindIII酶切位点间所得。

更为优选地，所述的重组载体以辣椒疫霉cDNA为模板，如SEQ ID NO：3-4所示的引物，进行PCR扩增；将PCR产物和pBINGFP2表达载体进行双酶切，回收纯化，连接转化大肠杆菌获得重组表达载体pBIN-PcMPK12。

本发明的目的之四在于提供一种包含所述重组载体的转化体。

优选地，所述转化体为包含所述重组载体的农杆菌。将所得的含有所述重组载体的农杆菌转化菌株即得到一种植物过表达菌株，所述菌株能够表达辣椒疫霉菌PcMPK12蛋白。

本发明的目的之五在于提供一种沉默载体，以pBIN-PcMPK12质粒为模板，如SEQID NO：5-6所示的引物进行PCR扩增，将PCR产物通过EcoRI和EcoRV酶切位点反向插入pTOReGFP沉默载体，双酶切后回收纯化，连接转化大肠杆菌获得重组沉默载体pTOR-PcMPK12。

本发明的目的之六在于提供所述的辣椒疫霉菌PcMPK12基因在调控病原物的侵染上的应用。

本发明的目的之七在于提供所述的重组载体在调控病原物的侵染上的应用。

本发明的目的之八在于提供所述的沉默载体在调控病原物的侵染上的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：