[发明专利]一种猪源益生菌复合物的制备和应用

说明书

本发明有提供了一种猪源益生菌复合物的制备，其特征在于：所述益生菌复合物成分包括枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌；复合物制备步骤如下：步骤a、将枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌活化后，菌液浓度达到对数生长期1‑2×10⁹cfu/ml；步骤b、将步骤a所得的菌液离心，弃上清液，收集菌泥；步骤c、将上述菌泥和保护剂按质量比1：2～5混合均匀，搅拌使保护剂充分与菌体接触，在﹣20℃～‑50℃、50‑80Pa条件下冷冻干燥成粉制剂，即得益生菌复合物。本益生菌复合物来自健康猪肠道并经过分离、训化后得到，具有抗逆性强、不容易失活，能显著提高猪肠道屏障功能和调节肠道菌群的作用，尤其适合断奶仔猪。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体的涉及一种猪源益生菌复合物的制备和应用。

背景技术

饲用抗生素在提高饲料利用率、减少疾病发生等方面均起到了一定的积极作用，但随其对畜禽产品质量、生态环境及人体健康产生的危害逐步被认识，寻找绿色无公害饲料添加剂已成为畜牧业迫切需要解决的问题。

猪肠道含有大量的益生菌、致病菌等不同类型微生物，正常情况下肠屏障功能阻止细菌和内毒素侵入机体。目前集约化养猪过程中，存在高密度、机械应激、妊娠等大量不同类型应激因素，首先引起肠道菌群失调，饲料消化吸收利用率降低，排泄物容易引起二次污染，若肠道菌群不及时恢复正常，最终导致病原微生物侵入机体，引发疾病。

枯草杆菌等益生菌可通过优化或调节肠道菌群来缓解应激对肠道的刺激，不仅增强肠道免疫屏障功能，还有促进饲料营养消化吸收作用。此外，大豆皂苷等低聚糖具有选择性促进益生菌增殖、优化肠道菌群、改善肠道微环境功能。双歧杆菌等益生菌可利用低聚糖,而一些有害细菌如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等对大多数益生元很难加以利用低聚糖，大豆皂苷主要存在于豆科植物中，约占大豆干重0.6-6.2％，大豆是猪饲料的主要原料之一，但有关筛选充分利用大豆皂苷益生菌菌种的报道少见。

目前制约益生产品难发挥其应有的作用的因素较多，主要表现为异源菌种适应环境黏附定植和快速繁殖能力差，菌种单一；同源细菌对环境抗逆性差，益生菌在储存加工过程中容易失活，这也是制约当前益生菌制剂推广应用的共性关键技术问题。

发明内容

本发明为解决现有技术问题，提供了一种将健康猪肠道益生菌通过微波、大豆皂苷环境训化，制备具有抗逆性强、提高猪肠道屏障功能和免疫功能的同源益生菌复合物方法及应用。

本发明采用的技术方案为：一种猪源益生菌复合物的制备，所述益生菌复合物成分包括枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌；复合物制备步骤如下：

步骤a、将枯草芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌活化后，菌液浓度达到对数生长期1-2×10⁹cfu/ml；

步骤b、将步骤a所得的菌液离心，弃上清液，收集菌泥；

步骤c、将上述菌泥和保护剂按质量比1：2～5混合均匀，搅拌使保护剂充分与菌体接触，在﹣20℃～-50℃、50-80Pa条件下冷冻干燥成粉制剂，即得益生菌复合物。

优选的，所述步骤c中保护剂大豆皂苷、海藻糖和L-盐酸半胱氨酸，其按重量分数比为1：(1～5)：(0.5～3)。

优选的，所述益生菌复合物来源于猪肠道，并经过分离、训化制备得到。

优选的，所述益生菌复合物从猪肠道的分离步骤包括：

步骤A、从健康猪肠道取一定量内容物，加入生理盐水，以220r/min速度摇床震荡30min，得到第一混悬液，再取上述混悬液加入生理盐水稀释、摇床震荡，重复以上稀释过程5-8次，取最终稀释混悬液1mL加至碳酸钙MRS培养基中，37℃温度下培养48h，得到益生菌MRS培养液；