[发明专利]同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡及其制备和应用

说明书

本发明公开了同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡，包括样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水垫；其中胶体金膜包被了检测抗体胶体金标记物，硝酸纤维素膜包被了呕吐毒素抗原的检测线T1、伏马毒素抗原的检测线T2、以及IgG抗体的质控线C。并公开了其制备方法和应用。本发明可同时实现对面粉中伏马毒素和呕吐毒素进行快速检测，检测方法快捷简便、成本低廉、灵敏度高。

技术领域

本发明属于农产品安全检测技术领域，具体地说涉及同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡及其制备和应用。

背景技术

伏马菌素(FB)是一种霉菌毒素，主要污染粮食及其制品，可产生急性毒性反应及潜在的致癌性。

呕吐毒素，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，属单端孢霉烯族化合物，因其能够引起猪的呕吐而得名，对人体有一定危害作用，为三级致癌物。

伏马毒素和呕吐毒素时刻威胁着人类和家畜的健康，目前的检测方法包括胶体金侧向层析技术，其能够定性检测单一种类真菌毒素残留，满足现场快速的要求，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。因此，一种同时可检测多种真菌素残留、重复性强、可定量的检测方法急需被开发。

发明内容

本申请提供了同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡，能够同时快速检测面粉中呕吐毒素和伏马毒素污染，且操作方便、方法简单。

技术方案如下：

同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡，包括试纸条；

试纸条包括：样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板；

胶体金膜上包被了检测抗体胶体金标记物，检测抗体胶体金标记物中的检测抗体包括呕吐毒素单克隆抗体和伏马毒素单克隆抗体；

硝酸纤维素膜上IgG抗体为羊抗鼠IgG抗体。

优选的，呕吐毒素抗原为呕吐毒素-牛血清白蛋白偶联抗原；伏马毒素抗原为伏马毒素-牛血清白蛋白偶联抗原。

优选的，上述检测卡还包括检测卡外壳，检测卡外壳设有加样窗口和检测结果显示窗口；

样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在底板上，样品垫和胶体金膜交叉重叠，胶体金膜和硝酸纤维素膜交叉重叠，硝酸纤维素膜和吸水垫交叉重叠，试纸条置于检测卡外壳内，使样品垫位于加样窗口处，硝酸纤维素膜位于检测结果显示窗口处。

同时定量检测面粉中两种毒素的检测卡的制备方法，包括如下步骤：胶体金膜的制备、硝酸纤维素膜的包被、样品垫的制备和检测卡的组装；

胶体金膜的制备方法为：

(1)胶体金溶液制备：取经王水处理过夜后的容器，加入超纯水、氯金酸，磁力加热搅拌至溶液沸腾后，加入柠檬酸三钠溶液，继续搅拌加热，至颜色完全变为透明的紫红色，保持溶液沸腾1-5min后，停止加热，室温搅拌冷却，保存备用；

(2)检测抗体的预处理：将要标记的呕吐毒素单克隆抗体和伏马毒素单克隆抗体分别用透析溶液透析12-48h，微孔滤膜过滤，稀释备用；

(3)检测抗体胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液两份，调节溶液pH，而后分别加入步骤(2)中稀释后的呕吐毒素单克隆抗体和伏马毒素单克隆抗体进行反应，反应结束后进行封闭处理，封闭完成后，溶液离心弃上清，将沉淀稀释得到呕吐毒素单克隆抗体胶体金标记物和伏马毒素单克隆抗体胶体金标记物；

(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)呕吐毒素单克隆抗体胶体金标记物和伏马毒素单克隆抗体胶体金标记物等体积混合均匀后，喷在载体玻璃纤维素膜上，自然晾干或烘干。

优选的，胶体金膜制备的具体方法为：