[发明专利]一种人内含子源性27碱基microRNA及在调节血压中应用

说明书

本发明公开了一种人内含子源性27碱基microRNA及在调节血压中应用，该人内含子源性27碱基microRNA是由eNOS第四内含子27碱基重复子重复4次产生，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。根据该序列制备其高表达质粒，将其高表达质粒与脂质体按质量比为3：1混合并经生理盐水稀释，经大鼠尾静脉注入SD大鼠体内，证明本发明的人内含子源性27碱基microRNA对大鼠血压具有调节作用，可用于研究高血压疾病，并最终可用于某些降压药物的筛选和制备高血压早期预警芯片，具有潜在的应用前景。

技术领域

本发明属于大鼠尾静脉注射及基因重组技术领域，具体地说，涉及一种人内含子源性27碱基microRNA及在调节血压中应用。

背景技术

高血压是最常见的心血管疾病，常引起严重的心、脑、肾并发症，影响着全球20％～50％的成年人。据统计，目前我国约有2亿高血压患者，每5个成年人中就1人患高血压，约占全球高血压总人数的1/5，全球每年有接近760万的患者死于该病。世界卫生组织(WHO)对高血压定义为：在未使用抗高血压药物的情况下，收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg。高血压又被分为1、2、3级：1)1级高血压，又称轻度高血压，收缩压140～159mmHg或舒张压90～99mmHg；2)2级高血压，又称中度高血压，收缩压160～179mmHg或舒张压100～109mmHg；3)3级高血压，又称重度高血压，收缩压≥180mmHg或舒张压≥110mmHg。值得关注的是，美国心脏协会在2017年底修改高血压标准为收缩压≥130mmHg和/或舒张压≥80mmHg,显示高血压的防治越来越引起高度重视；按照修改后的高血压标准，全球高血压患者的数目至少将翻一倍以上。

miRNA是一类在进化上高度保守、长约17～25个核苷酸的内源性非编码小分子RNA。迄今为止，在人类基因组中已经鉴定出了超过1000个在各种特定的组织中表达的miRNA，这些miRNA调节人类近一半的蛋白质编码基因；自1993年第一个miRNA(lin-4)被发现以来，迄今已在226种不同生物体中鉴定出28645个miRNA前体发夹结构及35828个成熟的miRNAs。miRNAs通过降解靶基因mRNA或抑制其翻译来调控对蛋白表达，控制细胞分化、增殖和调亡等病生理过程，参与癌症、糖尿病、心血管疾病等人类重大疾病的相关基因表达调节。

目前认为miRNA分为两大类：基因间隔miRNA和基因内含子源性miRNA，后者约占10％，来源于某些编码蛋白基因转录的mRNA前体序列中的内含子。内含子的发现和定义最早可追溯到1977年，几乎所有的真核细胞基因的mRNA前体物中的内含子在mRNA编辑过程中都要被剪切，因而长期以来内含子被认为是“多余的无用的”垃圾RNA序列。尽管也有一些研究发现它的基因调节作用，例如某些核蛋白的结合位点的在内含子部位，在p53依赖性基因激活和转录中起着重要作用，但直到近年来miRNA的发现，这些具有很强基因表达调节功能的内含子序列才被真正重视，并将其归类为内含子源性miRNA；迄今为止，利用生物信息学方法已鉴定出408种内含子源性miRNA，约占人类miRNA总数的40％。

一氧化氮(NO)在心血管调节方面具有十分重要的生物学作用，它能松弛血管平滑肌、维持器官血流量相对稳定、控制各种血管的静息张力，是主要的血压调节因子。NO以L-精氨酸为底物，由三种不同的NO合成酶(NOS)亚型介导产生：神经型(nNOS)、诱导型(iNOS)和内皮型(eNOS)。eNOS基因敲除小鼠表现为全身性高血压，与其在内皮依赖性超极化介导的松弛受损相关。而单次注射裸露人eNOS质粒DNA能使SHR大鼠血压降低5-6周。在受体激动剂的占领，或某些离子通道的开放，导致细胞内钙升高，激活eNOS产生NO。NO-cGMP信号在血管平滑肌细胞舒张和血压调节中的作用在人和动物均得到很好的表征，越来越多的证据表明，NO信号受损参与高血压的发病机制。