[发明专利]一种增加Ly6C+

说明书

本发明属于免疫学技术领域，涉及一种增加Ly6Csupgt;+/supgt;巨噬细胞的弓形虫来源的抗原分子——刚地弓形虫微线体蛋白(Toxoplasma gondii microneme protein，TgMIC3)的肽段及其应用。所述的肽段命名为MIC3，序列如SEQID NO.2所示，本发明进一步公开了该肽段在制备增加Ly6Csupgt;+/supgt;巨噬细胞的抗原中的应用，以及其作为增强巨噬细胞炎症应答的免疫增强剂和在制备治疗感染性疾病药物中的应用。本发明提供了肽段MIC3在制备治疗感染性疾病药物和制剂方面广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，涉及一种增加Ly6C⁺巨噬细胞的弓形虫来源的抗原分子——刚地弓形虫微线体蛋白(Toxoplasma gondii microneme protein，TgMIC3)的肽段及其应用。

背景技术

关于感染性疾病的治疗，传统的治疗方法主要是化学药物治疗，如病毒感染使用金刚烷胺等化学制剂治疗；细菌感染使用抗生素等(尚建中.感染性疾病诊断治疗[M].河南医科大学出版社,2002.)。而现在，免疫治剂作为新兴的治疗方法，也越来越多地被用于感染性疾病的治疗，如用生物制剂干扰素治疗病毒。

巨噬细胞分布在人体的各个组织中，可以维持体内免疫平衡，抵抗外来病原体的入侵，在人体免疫防御方面发挥重要作用。在细菌感染方面，急性感染时，巨噬细胞通过广泛分布于其表面的模式识别受体识别细菌病原相关分子模式，进而向M1型为主的巨噬细胞活化，分泌大量TNF-α、IL-1、NO等典型的促炎细胞因子并激活适应性免疫应答；而在慢性感染中，巨噬细胞主要以M2型极化的形式存在，以防过度炎症反应所造成的严重脓毒血症(Murray P J,et al,Nature Reviews Immunology,2011,11(11):723-737.)。在各类寄生虫感染过程中，巨噬细胞同样通过不同的极化状态发挥不同作用，如日本血吸虫感染的早期，虫体表面分子及分泌因子可活化巨噬细胞，上调M1型巨噬细胞iNOS、IL-12等的表达，进而诱导NK细胞、T细胞分泌重要的促炎因子，如IL-12、IFN-γ等，导致急性炎症及虫体死亡的发生；而血吸虫感染晚期主要由M2型巨噬细胞分泌TGF-β，促进纤维化及胶原形成，诱导机体的修复(Herbert D R,et al.Immunity,2004,20(5):623-635.)。

Ly6C⁺巨噬细胞在激活机体免疫应答、抵抗病原体感染等方面发挥积极作用。在小鼠感染弓形虫引起的慢性脑炎模型上，由外周向中枢募集的Ly6C⁺单核细胞具有显著的促进炎症功能，能够分泌IL-1α、IL-1β、iNOs、TNF-α等，发挥局部杀虫作用(Biswas A,etal.Journal of Immunology,2015,194(7):3223.)。此外，弓形虫经口感染，能够迅速向小肠绒毛募集Ly6C⁺巨噬细胞，在局部分泌TNF-α、IL-12等炎性细胞因子，形成抵抗急性外源性感染的第一道防线(Dunay I R,et al.Immunity,2008,29(2):306-317)。

目前已有报到一些药物可以诱导Ly6C⁺巨噬细胞。如对乙酰氨基酚(N-acetyl-p-aminophenol，APAP)，但由于过量使用会导致肝损伤，所以使用时必须严格控制用量。因此，从可以诱导Ly6C⁺巨噬细胞的寄生虫分子中，寻找可以增加Ly6C⁺巨噬细胞的多肽抗原，具有较好的可行性。

已公开的刚地弓形虫微线体蛋白3(Toxoplasma gondii microneme protein，TgMIC3)基因在Genebank中的序列号为AJ132530.1。已知TgMIC3的一段肽段(234aa～306aa)可以和弓形虫感染病人的血清反应，可用于弓形虫病的诊断，目前已有商业化的产品。商品名称为Active弓形虫MIC3蛋白片段，生产商Abcam，货号ab73745。但关于这段肽段对Ly6C⁺巨噬细胞的影响却未见报道。