[发明专利]一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法在审
申请号: | 201911224122.8 | 申请日: | 2019-12-04 |
公开(公告)号: | CN110907579A | 公开(公告)日: | 2020-03-24 |
发明(设计)人: | 赵玉丛 | 申请(专利权)人: | 河南牧业经济学院 |
主分类号: | G01N30/88 | 分类号: | G01N30/88;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54 |
代理公司: | 郑州泽创知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 41159 | 代理人: | 杨会军 |
地址: | 450000 河南省郑州*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 白头翁 秦皮 hplc 定量分析 方法 | ||
1.一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
步骤一:色谱条件的确立:将流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液的比例由8:92改为12:88,确定色谱条件为:色谱柱:Waters Symmetry C18柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液12:88;流速:1.0mL/min;波长:334nm;柱温:30℃;进样量:10μL;该色谱条件下理论塔板数按秦皮乙素峰计算不低于5000;
步骤二:提取工艺:精密称取白头翁散1.875g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,密塞,称定重量,超声提取40min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
步骤三:溶液的配制:包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备:
所述对照品贮备溶液的制备方法为:精密称取秦皮甲素、秦皮乙素对照品适量,加甲醇使成每1mL含秦皮甲素408μg、秦皮乙素260μg的混合溶液,作为对照品贮备溶液;
所述对照品溶液的制备方法为:精密量取对照品贮备溶液5mL,加甲醇逐级稀释,得一系列浓度分别为25.5μg/mL秦皮甲素和16.25μg/mL秦皮乙素、51μg/mL秦皮甲素和32.5μg/mL秦皮乙素、102μg/mL秦皮甲素和65μg/mL秦皮乙素、204μg/mL秦皮甲素和130μg/mL秦皮乙素、408μg/mL秦皮甲素和260μg/mL秦皮乙素的混合对照品溶液;
所述供试品溶液的制备方法为:按上述步骤二中的提取工艺制备。
所述阴性对照溶液的制备方法为:取阴性样品粉末1.875g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,密塞,称定重量,超声提取40min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
所述对照药材溶液的制备方法为:取秦皮对照药材粉末1.875g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,密塞,称定重量,超声提取40min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
步骤四:方法学考察:包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验;
所述专属性试验具体为分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液适量,按步骤一中的色谱条件测定;
所述线性关系的考察具体为取上述系列浓度的对照品溶液,按步骤一中的色谱条件测定,记录峰面积;
所述精密度试验具体为选取秦皮甲素和秦皮乙素浓度分别为102μg/mL、65μg/mL混合对照品溶液,重复进样6次,记录峰面积并计算相对标准偏差RSD,进行日内精密度测定;
所述准确度试验具体为取同批次的白头翁散供试品共9份,每份约0.5g,分为3组,分别加入一定量的秦皮甲素和秦皮乙素对照品,按步骤一中的色谱条件测定和步骤二中的提取方法处理,记录色谱图,按以下公式计算秦皮甲素和秦皮乙素的平均回收率和RSD:
回收率%=(C-B)/A×100%;
C为实际测得量;B为已知样品含量;A为对照品加入量;
步骤五:样品测定:包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定;
所述自制白头翁散样品含量测定具体为精密称取3批自制白头翁散各1.875g,按步骤三中的阴性对照溶液的制备方法和步骤一中的色谱条件处理,记录峰面积,并用外标法计算样品含量;
所述市售白头翁散含量测定具体为取8批市售白头翁散样品各精密称取1.875g,按步骤三中的对照药材溶液的制备方法处理,按步骤一中的色谱条件处理,并用外标法计算样品含量。
2.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法,其特征在于:步骤二中所述提取工艺的优化方法具体为:进行超声提取和加热回流提取的比较,以提取率更高的超声提取法取代兽药典中规定的加热回流法;提取时间进行20min、40min、60min的对比(结果见表2),鉴于40min、60min提取的含量较为相近,且都高于20min,将选择时间由兽药典中规定的60min缩短为40min。
3.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法,其特征在于:所述阴性样品粉末为自制的无秦皮药材。
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