[发明专利]一种黑茶茶褐素对照品及其应用

说明书

一种黑茶茶褐素对照品，是取黑茶，用沸水浸提取得到黑茶水提取物，将所得黑茶水提取物过滤、浓缩至膏状；将膏状物用乙醇进行超声提取，反复多次直至乙醇无色，乙醇不溶物用60‑100℃热水溶解，旋转蒸发至无醇味，再加入等体积的乙酸乙酯萃取多次，至乙酸乙酯层无色；将水相旋转蒸发去除残留的乙酸乙酯，然后用离心滤膜离心，截留液加水再次离心，反复多次，直至离心透过液无色，将截留液真空冷冻干燥，所得粉末即为茶褐素对照品。从而建立检测黑茶茶褐素含量的高效液相色谱法和紫外分光光度法，以对黑茶茶褐素含量作出较为准确、快速的检测，有利于黑茶茶褐素的分析测定。

技术领域

本发明涉及黑茶茶褐素含量检测用试剂，具体涉及一种黑茶茶褐素含量检测用对照品，同时涉及该对照品在检测黑茶茶褐素含量的高效液相色谱法和紫外分光光度法中的应用。

背景技术

黑茶茶褐素是指一类性质类似于红茶茶褐素的高聚合物，能溶于水而不溶于乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂的褐色色素，它们是一类十分复杂的化合物，主要由多酚与蛋白质或多糖形成的复合物，现代研究表明，茶褐素具有降脂减肥、抗氧化、降血脂等多种生理活性。

传统的茶褐素含量检测采用红茶茶褐素检测方法，很多学者在研究中发现，将红茶与普洱茶、茯砖茶的色谱图进行对比，发现红茶与黑茶在380nm处具有截然不同的色谱图及化学组成成分，因此，红茶茶褐素检测方法并不适用于黑茶茶褐素检测方法。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的不足，提供一种黑茶茶褐素含量检测用对照品，同时提供根据该对照品的光谱性质，建立检测黑茶茶褐素含量的高效液相色谱法和紫外分光光度法，以对黑茶茶褐素含量作出较为准确、快速的检测，而利于黑茶茶褐素的分析测定。

为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种黑茶茶褐素对照品，该茶褐素对照品是按如下步骤制备得到：

a.以黑茶为原料，用沸水浸提得到黑茶水提取物，将所得黑茶水提取物过滤、浓缩至膏状；

b.将膏状物用95％质量浓度的乙醇进行超声提取，重复多次直至乙醇无色，乙醇不溶物用热水溶解，旋转蒸发至无醇味，再加入等体积的乙酸乙酯萃取多次，至乙酸乙酯层无色；

c.将水相旋转蒸发去除残留的乙酸乙酯，然后用离心滤膜离心，截留液加水再次离心，反复多次，直至离心透过液无色，将截留液真空冷冻干燥，所得粉末即为茶褐素对照品。

上述步骤a中黑茶水提取物是于黑茶中加入为黑茶重量8-10倍的沸水，80-100℃水浴浸提2-3次，每次30-60min，合并浸提液，即得。

上述步骤b中超声提取时的温度为25-60℃，每次提取时间为20-30min，乙醇用量为膏状物重量的2-3倍；乙醇不溶物用为乙醇不溶物重量1-2倍的60-100℃热水溶解。

上述步骤c中离心滤膜孔径为3000Da。

上述黑茶为普洱茶或茯砖茶。

茶褐素是一类能溶于水而不溶于乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂的褐色色素。本试验根据茶褐素的定义和性质采用沸水提取，然后用95％乙醇和乙酸乙酯除去儿茶素类、咖啡因、茶红素等杂质，这些杂质在280nm下具有较强吸收；再采用低分子量的滤膜除去小分子量的化合物，从而截留分子量大的色素，而获得茶褐素对照品。

本发明同时提供上述黑茶茶褐素对照品在建立黑茶茶褐素的高效液相色谱测定方法和紫外分光光度测定方法中的应用。该高效液相色谱测定方法和紫外分光光度测定方法的检测波长皆为440nm。

采用本发明的黑茶茶褐素对照品建立的高效液相色谱法和紫外分光光度法对不同黑茶样品进行检测，结果显示，该两种方法检测的茶褐素含量无显著性差异，但与传统罗伯特方法检测的茶褐素含量具有极显著性差异。本紫外分光光度法制样简单，只需提取直接检测，可代替高效液相色谱法进行快速检测。