[发明专利]一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法

说明书

本发明涉及一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法。所述高效液相色谱方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液‑甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1～99:5。根据本发明的方法增强了对强极性杂质的保留，能够有效分离磷霉素钠复杂的杂质体系，具有较好的通用性和特定杂质的专属性，灵敏度高，操作方便，分析时间适中，为该化合物的质量控制提供了有效保障。

技术领域

本发明属于本药物分析技术领域，具体涉及一种用于测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法。

背景技术

磷霉素是1967年由美国默克公司(Merck公司)和西班牙CEPA公司联合开发的一种新型广谱抗菌素，在结构上属于磷酸衍生物，具有独特的化学结构，分子量小。磷霉素的作用机制独特，能够抑制细胞壁合成的早期阶段，并且不对其他抗生素产生交叉耐药性，主要用于治疗革兰氏阴性和阳性细菌感染。

目前，磷霉素主要有4个品种，分别是磷霉素钠盐、磷霉素钙盐、磷霉素氨丁三醇盐、磷霉素苄胺盐。磷霉素钠盐、钙盐于1975年在欧洲上市，首先在西班牙投入工业化生产，之后意大利和德国也陆续开始了工业化生产。1980年明治公司的产品在日本上市。磷霉素氨丁三醇于1988年在欧洲上市；1996年12月被美国FDA批准在美国上市。就使用情况而言，欧洲和日本及东南亚使用较多的是钠盐和钙盐，日本药典只收载了磷霉素钠盐、磷霉素钙盐两个品种。而在美国以磷霉素氨丁三醇为主，销量较大。

其中，磷霉素钠的制备及存储过程中可能会生成多种杂质，而产品中杂质的种类和含量直接关系到药品质量和用药安全，因此在使用之前需要准确测定磷霉素钠相关杂质的含量。

刘辉等人的“高效液相色谱法测定磷霉素关键中间体丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸”(刘辉，裴世红等，《分析试验室》，2014，33(3):300)公开了一种测定磷霉素钠有关物质的方法。该方法采用Agilent ZORBAX氨基柱为固定相、以磷酸盐溶液和乙腈为流动相、以氨基柱为色谱柱研究了2种中间体杂质丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的含量测定。从结果来看，该方法适于磷霉素合成反应中丙二烯磷酸和顺丙烯磷酸的含量测定。然而，上述方法存在不少缺点，例如采用的氨基柱较为脆弱，且由于磷霉素钠系列杂质极性大、出峰快而无法有效保留、分离极性较大的复杂杂质混合体系。

因此，为了能够有效分析和检测药品质量，保证用药安全，仍需要开发出一种便捷、有效检测磷霉素钠及其复杂杂质的分析方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的一个目的在于提供一种高效分离和测定磷霉素钠((-)-(1R，2S)-1，2-环氧丙基膦酸二钠盐，结构式见式(1))杂质的高效液相色谱方法，从而实现对其杂质谱的准确监控和质量的严格控制。

上述目的通过以下方案来实现：

在一方面，本发明提供了一种测定磷霉素钠杂质的高效液相色谱方法，所述方法使用利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱并采用磷酸水溶液-甲醇混合液为流动相，其中所述磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.04％～0.06％，磷酸水溶液与甲醇的体积比为99:1～99:5。在一个优选方案中，磷酸水溶液中磷酸的浓度质量分数为0.05％。

针对磷霉素钠杂质的分子量较小、极性大的特点，本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(例如，Warters Atlantis T3色谱柱)进行检测，该色谱柱采用三官能团C18烷基键合相，保证了键合密度，提升了极性化合物的保留并且能够实现100％水相流动相兼容，从而提高了分离效果。

进一步优选地，所述色谱柱的粒径为5μm，色谱柱长度为250mm，色谱柱内径为4.6mm。

通过利用粒径为5μm的色谱柱，分离较快，柱效较高。同时，采用长度较长的色谱柱(例如250mm)，能够提高分离度，从而提高分离水平。