[发明专利]一种筛查糖尿病的联合型代谢标志物的应用及其试剂盒

说明书

本发明涉及空腹血清中代谢物：半乳糖，1,5‑脱水山梨糖醇，N‑乙酰葡糖胺，2‑羟基丁酸作为组合标志物在制备用于快速诊断受试者中糖尿病患者的试剂盒中的新应用。通过检测来自受试者空腹血清样本中的上述四种代谢物的浓度，基于二元逻辑回归方程计算所述组合标志物变量P，以及判断截点值，判断受试者是否患有糖尿病。所述试剂盒可实现高灵敏、高效检测，本发明涉及的几种小分子代谢物，具有检测成本低，重复性好的特点。本发明可应用于辅助快速筛查糖尿病人群中得到应用，且可与传统临床指标空腹血糖相互补充的特点，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及已知代谢物的新用途。本发明涉及血清中的半乳糖，1,5-脱水山梨糖醇，N-乙酰葡糖胺，2-羟基丁酸组合用作为诊断糖尿病的组合标志物，并涉及检测筛查受试人群中糖尿病患者的试剂盒。

背景技术

糖尿病是一个全球性的健康问题，其发病率呈现逐年上升的趋势而诊断率却不足50％。糖尿病患者由于胰岛素功能或分泌异常，从而引发各种各样的并发症。中国是全世界糖尿病患者最多的国家，若不能及时对其进行干预和治疗则会加大国家公共卫生健康系统的负担。目前，空腹血糖和口服75g葡萄糖耐量(OGTT)测试是诊断糖尿病的金标准。但是由于OGTT测试需要在2小时内每隔15-30分钟进行一次血样的采集、检测，所以整个测试耗时较长，过程繁琐，不适合于大基数人群中糖尿病患者的快速筛查和诊断。因此开发一种快速、简便的临床诊断新方法对于提高患者生存质量和降低并发症、死亡率具有重要意义。

代谢组学是继基因组学与蛋白质组学之后迅速发展起来的一门新兴学科，旨在对生物体内所有小分子代谢物进行定性、定量分析，寻找代谢物与生理、病理变化的相对关系。代谢组学作为一个新兴的工具，已经被广泛运用在不同的疾病研究中，如糖尿病，肝病，肾病，心血管病等。由于单一代谢物受到外界的干扰和影响较大，所以从血清代谢物中筛选多种代谢物组合成联合型标志物能够增加判断稳定性和准确率。

本发明利用液相色谱串联三重四级杆质谱检测糖尿病患者和正常人的空腹血清样本中代谢谱，筛选出半乳糖，1,5-脱水山梨糖醇，N-乙酰葡糖胺，2-羟基丁酸组合，作为一种联合型代谢标志物判别受试者中的糖尿病患者。目前尚无将这四种血清代谢物联合作为糖尿病诊断的报道。

发明内容

本发明的目的是针对糖尿病人群快速筛查困难的临床实际问题，提供了一种代谢物组合用于糖尿病诊断中的应用，可提供用于上述代谢物组合的检测方法如下。为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

(1)试剂盒组成：

a.标准品：半乳糖，1,5-脱水山梨糖醇，N-乙酰葡糖胺，2-羟基丁酸，所述标准品分别用于对应的空腹血清中半乳糖，1,5-脱水山梨糖醇，N-乙酰葡糖胺，2-羟基丁酸的定性和定量标准曲线；

b.用于预处理来受试者的空腹血清样本的提取液：含内标浓度为0.1-0.5μg/mL马尿酸-D5，1.0-2.0μg/mL谷氨酰胺-D5，0.1-1.0μg/mL苯丙氨酸-D5，0.1-0.5μg/mL胆碱-D4的甲醇/乙腈溶液。

c.洗脱液：流动相A为含体积百分比0.01-1.0％乙酸和5-15mM乙酸铵的乙腈水溶液，其中乙腈和水的体积百分比为80:20-95:5，流动相B为含体积百分比0.01-1.0％乙酸的5-15mM乙酸铵水溶液。(2)标准品预处理方法：

将半乳糖，1,5-脱水山梨糖醇，N-乙酰葡糖胺，2-羟基丁酸标准品配成一系列100μg/mL-0.1ng/mL浓度的混标，可以设置10-20个不同浓度点；混标溶液加入200-400μL提取液，离心后吸取200-400μL上清于1.5mL Eppendorf管中进行冷冻干燥，然后用体积百分比为1:4-2:1的乙腈/水复溶。

(3)血样预处理方法：