[发明专利]一种PT141合成方法

说明书

本发明公开了一种PT141合成方法，属于多肽合成技术领域。本发明的合成方法包括如下步骤(1)以Rink HMBA‑AM Resin和Fmoc‑Lys(Boc)‑OH为原料，制备Fmoc‑Lys(Boc)‑HMBA‑Am Resin；(2)在步骤(1)制得的Fmoc‑Lys(Boc)‑HMBA‑Am Resin上通过Fmoc固相合成法依次偶联保护基氨基酸，得到线性PT141全保护肽树脂；(3)将步骤(2)制得的线性PT141全保护肽树脂用裂解液裂解脱除氨基酸保护基，对所得产物进行环化处理，使得肽链在2位的Asp处与7位Lys处成环；(4)对步骤(3)所得环化产物进行甲酯化脱除HMBA‑Am Resin残基，而后将产物水解，经过纯化，冷冻干燥得PT141。本发明的方法相对其他固相方法收率更高，相对酶制剂方法成本较低，且易于操作，工艺较为简单。

技术领域

本发明涉及一种PT141合成方法，属于多肽合成技术领域。

背景技术

PT141，即布雷默浪丹(Bremelanotide)，是一种alpha-黑素细胞刺激激素类似物。由美国Palatin公司开发作为一种治疗性功能障碍的环肽类药物。PT141为人工合成的氮端乙酰化环七肽化合物，肽序为

Ac-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-OH

其化学结构存在两处羧基，天冬氨酸侧链羧基和赖氨酸侧链氨基通过形成酰胺键成环，由于C端羧基的存在，直接液相环化产物不唯一，对合成工艺来说存在挑战。目前，合成PT141方法主要为固相合成法，以Fmoc-Asp(OAllyl)-OH和Fmoc-Lys(Alloc)-OH为原料进行合成，但是在合成过程中存在保护氨基酸和脱保护试剂昂贵以及采用HF裂解方式对设备要求较高，并且对环境污染也较严重的问题，同时产品收率也比较低。中国专利200710048824.6公开了一种采用Fmoc(芴甲氧羰基)保护的固相合成方法，收率为17％。中国专利200610086841.4公开的PT-141的固相合成方法，收率为40％以下。

中国专利201510667256.2公开了一种分别合成Ac-Nle-Asp(COOH)-otBu和Boc-His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)-TrP(Boc)-Lys(IVDde)-HMBA-P的方法，该方法需要合成大量片断Ac-Nle-Asp(COOH)-otBu，同时脱除Lys保护基时需要使用水合肼等危险化合物。

中国专利201710619602.9使用酶制剂进行环化，对于反应环境条件控制要求比较严格，且酶制剂较昂贵。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种PT141合成方法，本发明的方法相对其他固相方法收率更高，相对酶制剂方法成本较低，且易于操作，工艺较为简单。

本发明的第一个目的是提供一种PT141合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以Rink HMBA-Am Resin和Fmoc-Lys(Boc)-OH为原料，制备Fmoc-Lys(Boc)-HMBA-Am Resin；

(2)在步骤(1)制得的Fmoc-Lys(Boc)-HMBA-Am Resin上通过Fmoc固相合成法依次偶联保护基氨基酸，得到线性PT141全保护肽树脂；

(3)将步骤(2)制得的线性PT141全保护肽树脂用裂解液裂解脱除氨基酸保护基，对所得产物进行环化处理，使得肽链在2位的Asp处与7位Lys处成环；

(4)对步骤(3)所得环化产物进行甲酯化脱除HMBA-Am Resin残基，而后将产物水解，经过纯化，冷冻干燥得PT141。

进一步地，在步骤(2)中，脱Fmoc使用的试剂为15-25％的哌啶/DMF。