[发明专利]一种氯霉素上转换荧光探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种氯霉素上转换荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)上转化荧光纳米材料的制备：

称取304.29mg四水合醋酸钇，38.00mg四水合醋酸镱，3.46mg四水合醋酸铥，6mL油酸，17mL十八烯依次加入到三颈烧瓶中，剧烈搅拌并在抽真空状态下升高温度至100℃，在氩气的保护下快速将反应温度升高至160℃反应30min，然后将其自然冷却至室温，称取100mgNaOH和148mg NH₄F溶于10mL的甲醇，逐滴缓慢地加入到上述反应中搅拌30min。并升高温度至100℃保持10min，最后，在氩气保护下将升温至300℃，保持1h，随后，自然冷却至室温；产物经离心处理后得到，并用乙醇洗涤三次后，置于烘箱中干燥，得到油溶性上转换材料，然后准确称取1.5g聚丙烯酸，加入30mL二甘醇，氩气保护升温至110℃反应1h，称取90mg OA-UCNPs溶解于甲苯中，快速加入，110℃反应1h后，加热到240℃并保持1h；然后自然冷却至室温，并加入适量稀盐酸溶液，离心收集沉淀物，用超纯水离心洗涤沉淀物三次后，置于烘箱中干燥，得到水溶性上转换荧光纳米材料；

(2)氯霉素上转换荧光探针的制备：

取5mg水溶性上转换荧光纳米材料超声溶解于2mL 2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中；称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺1.536mg和N-羟基琥珀酰亚胺2.4mg分别溶解于200μL MES溶液中，迅速加入到上述混合溶液中，30℃反应3h；反应完毕后，离心分离沉淀，离心产物用去离子水离心洗涤3次；用1mL N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸缓冲液将上述产物复溶，加入一定量的氯霉素单克隆抗体，30℃反应4h；反应完毕后，取15mg牛血清白蛋白加入到上述混合溶液中，30℃反应1h。然后离心收集沉淀产物，并用去离子水洗涤3次，最后复溶于1mL HEPES溶液中，最终得到氯霉素上转换荧光探针，干燥条件下保存。

2.根据权利要求1所述的一种氯霉素上转换荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中四水合醋酸钇、四水合醋酸镱和四水合醋酸铥的摩尔质量比为90:9:1；1.5g聚丙烯酸需溶解于30mL二甘醇中，加入OA-UCNPs的量为90mg，甲苯体积为6mL。

3.根据权利要求1所述的一种氯霉素上转换荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中牛血清白蛋白的量为15mg，用于封闭上转换荧光探针上未与氯霉素抗体结合的位点。

4.权利要求1-3任一权利要求所述制备方法，其特征在于，得到的上转换荧光纳米材料的直径在28-32nm之间，蓝色荧光强度高，荧光光谱特征峰在482nm处，980nm红外激发器激发。

5.权利要求1-3任一权利要求所述制备方法得到的上转换荧光探针用于氯霉素的检测。