[发明专利]检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条，包括反应支持物、吸水纸垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫、金标抗原保护膜，其中胶体金垫为含有胶体金标记的戊型肝炎病毒ORF2蛋白的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上带有包被山羊抗人IgG抗体、兔抗HEV多克隆抗体的两个条带；本发明能检测戊型肝炎病毒IgG抗体，该方法简便、快捷、准确，不需要特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合大批量检测，适用于基层筛选和流行病学调查，对戊型肝炎病毒感染的早期及中期都能起到辅助诊断的作用，对判断人体近期是否感染戊型肝炎病毒抗原具有参考意义。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条及制备方法。

背景技术

人类戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus, HEV）是全世界范围内青壮年易感染的病原，免疫缺陷病人及老年人，孕妇也是HEV的易感人群。戊型肝炎病毒在任何国家的孕妇中都有很高的感染率和发病率。

人体感染HEV后，产生特异性IgG抗体，因此，可以通过试纸条法快速检测人体血液中戊型肝炎病毒IgG抗体作为HEV筛查感染临床诊断和HEV感染预后的初步依据。

然而，目前HEV临床诊断方法主要是通过病毒分离培养、间接免疫荧光法、RT-PCR和ELISA法检测抗原，或者利用ELISA法检测HEV特异性抗体。但是上述检测方法均需要特殊的仪器设备和专业培训人员，并且在实验室才能进行检测，费用高昂、操作复杂，耗时长，不适于临床筛查，更不适宜于现场即时检测。因此，急需建立一种快速、简便、高效，并能广泛推广的戊型肝炎病毒检测方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种简便、快捷的检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条，其包括反应支持物、吸水纸垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫、金标抗原保护膜，胶体金垫为含有胶体金标记的戊型肝炎病毒ORF2蛋白的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上带有包被山羊抗人IgG抗体、兔抗HEV多克隆抗体的两个条带。

所述金标抗原保护膜为玻璃纤维膜或滤纸纤维膜。

所述吸水纸垫为滤纸。

所述反应支持物为PVC胶板。

本发明另一目的提供上述检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条的制备方法，方法如下：

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

（1）将山羊抗人IgG抗体、兔抗HEV多克隆抗体分别固相于硝酸纤维素膜上，形成检测条带和质控条带；将含有胶体金标记的戊型肝炎病毒ORF2蛋白包被在玻璃纤维膜上制得胶体金垫；其中固相方法及包被方法均为常规方法；

（2）依次将硝酸纤维素膜、胶体金垫、吸水纸垫、金标抗原保护膜粘贴在PVC胶板上，且相互之间有0.2mm的重叠，压紧避免留有气泡影响实验结果，使用切割机切割制得宽度在0.4～0.6cm的胶体金试纸条；置于相对湿度40～80％，温度18～25℃的含有干燥剂的铝箔袋中短期（1周）保存备用；大批量制备应该置于4℃长期（1年）保存。

使用时从冰箱取出的试纸条恢复至室温后，再开启密封袋使用。

本发明检测戊型肝炎病毒IgG抗体的胶体金试纸条的检测样本为血液或血清。

本发明的工作原理及有益效果：

1、通过在硝酸纤维素膜（NC膜）上包被含有山羊抗人IgG抗体、兔抗HEV多克隆抗体的两个条带，并结合胶体金标记的的戊型肝炎病毒ORF2蛋白，实现了用试纸条检测人戊型肝炎病毒IgG抗体的目的；克服了现有技术检测成本高、操作复杂、繁琐、耗时长、需要特殊仪器、且必需专业人员才能操作的不足。