[发明专利]一种基于CRISPR技术的均相酶免疫检验系统及其方法和应用

权利要求书

1.一种基于CRISPR技术的均相酶免疫检验系统，其特征在于，所述系统包括抗小分子特异性抗体的检测试剂R1和R2，所述R1为包含小分子特异性抗体和小分子特异识别基团的缓冲体系；所述R2包含Cas蛋白-sgRNA复合物和FQ reporter；所述系统是通过液体体系中游离的小分子与偶联在小分子特异识别基团上的小分子探针对特异性抗体的结合位点进行竞争原理，实现小分子的定性和定量分析。

2.一种基于CRISPR技术的均相酶免疫检验系统，其特征在于，所述系统包括抗小分子特异性抗体的检测试剂R1和R2，所述R1为包含带磁珠的小分子特异性抗体和小分子特异识别基团的缓冲体系；所述R2包含Cas蛋白-sgRNA复合物和FQ reporter；所述系统是通过液体体系中游离的小分子与偶联在小分子特异识别基团上的小分子探针对特异性抗体的结合位点进行竞争原理，实现小分子的定性和定量分析。

3.如权利要求1或2所述的均相酶免疫检验系统，其特征在于，所述小分子特异识别基团为小分子修饰DNA/RNA探针，所述小分子修饰的DNA/RNA探针包含Cas蛋白识别所需对应PAM序列的核酸序列。

4.如权利要求1或2所述的均相酶免疫检验系统，其特征在于，所述小分子为分子量小于2000Da的有机分子；所述小分子包括治疗药物、激素、毒品、农兽药、活体代谢物中的待检小分子。

5.如权利要求1或2所述的均相酶免疫检验系统，其特征在于，Cas蛋白包括Cas12a，Cas13，Cas14及其他Cas系列蛋白。

6.一种CRISPR技术的均相酶免疫检验方法，包括如下步骤：

(1)计算不同浓度标准品反应速度绘制标准曲线

通过自动加样仪器，首先加入标准品，随后加入R1试剂，最后加入R2试剂，测定不同时间点的荧光值，计算不同浓度标准品的反应速率，绘制标准曲线；

(2)计算样本体系中小分子的浓度

按照步骤(1)的顺序依次向自动加样仪器中加入液体样本、R1试剂、R2试剂，通过样本的反应速率值，并根据标准曲线中反应速率与标准品浓度的关系式得到样本中小分子浓度值。

7.如权利要求6所述的均相酶免疫检验方法，其特征在于，所述R1为包含小分子特异性抗体和小分子特异识别基团的缓冲体系；所述R2包含bing buffer，Cas蛋白-sgRNA复合物，FQ reporter，所述R2可以是冻干粉或缓冲体系。

8.如权利要求6所述的均相酶免疫检验方法，其特征在于，所述R1为包含带磁珠的特异性抗体和小分子特异识别基团的缓冲体系；所述R2包含bing buffer，Cas蛋白-sgRNA复合物，FQ reporter，所述R2可以是冻干粉或缓冲体系。

9.如权利要求6所述的均相酶免疫检验方法，其特征在于，所述Cas蛋白-sgRNA复合物的体系如下：

50mM NaCl，10mM Tris-HCl，10mM MgCl₂，100μg/ml BSA，pH 7.9(25℃)；

FQ reporter：包括

a./56-FAM/TTATT/3IABKFQ/；b./56-FAM/TTATT/3-BHQ-1/。

10.权利要求1～5任意一项所述检验系统、权利要求6～9任意一项所述检验方法在治疗药物、激素、毒品、农兽药或活体代谢物中小分子检测中的应用。