[发明专利]基于MALDI-TOF MS平台检测的212个Y-SNP的法医学复合扩增试剂盒

说明书

本发明属于法医遗传学领域，具体涉及基于MALDI‑TOF MS平台检测的212个Y‑SNP的法医学复合扩增试剂盒。本发明方案是基于MALDI‑TOF MS平台检测的212个Y‑SNP的法医学复合扩增试剂盒，包括用于复合扩增的212对引物混合物和212个单碱基延伸引物混合物，分为5个复合扩增体系，使检测212个Y‑SNP成为现实。本发明试剂盒应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOF MS)和单碱基延伸技术，可一次性获得多个生物性检材的212个Y‑SNP遗传标记的基因分型，并推断中国群体来源的男性样本的地理、民族甚至是家系来源。

技术领域

本发明属于法医遗传学领域，具体涉及一种用对未知来源的中国男性生物学检材在Y染色体进化树上的位置进行高分辨划分的基于212个Y-SNP的法医学复合扩增试剂盒。

背景技术

Y染色体为男性特有染色体，除拟常染色体区(pseudo autosomal region,PAR)域外，95％的Y染色体特异区在减数分裂中不会发生同源重组，因而被称为非重组区(non-recombination regions of Y chromosome,NRY)能够在世代中稳定遗传，具有父系遗传、非重组、有效群体小和在生物地理学上具有特殊性特点，使其在法医学方面发挥着重要作用。Y染色体上的遗传标记应用较多的有两类：一类是双等位基因，如单核苷酸多态性(Ychromosomal single nucleotide polymorphism,Y-SNP)，另一类是多等位基因，如微卫星又称为短串联重复序列(Y-chromosome Short Tandem Repeats,Y-STR)。

Y-STR被广泛用于男性家系排查和性犯罪男女混合成分检验等公安实战当中，成为追溯父系来源的最佳选择，具有重要的法医学应用价值。然而，由于Y-STR突变率和单倍型多样性在不同地域人群中表现出明显差异，比如，经常出现无关个体间享有同一个单倍型和同一父系个体间单倍型存在差异等现象。因此解决Y-STR突变造成的潜在混淆，正确判断犯罪现场检材的地理、民族甚至是家系来源，是法医学亟待解决的问题。

Y-SNP具有突变率低、遗传稳定性高、分布广泛、位点丰富、易于筛选的特点。Y-SNP相对于Y-STR突变率低(约10^-9)，同一父系个体发生突变的概率很低，大部分突变是按一定时间顺序“一次性发生”，其突变一旦产生后绝大部分都会由祖先传递给后代，由于突变是随机的，每个个体从其祖先那里继承下来的突变位点都不一样，因而出现了许多不同的Y染色体单倍群(haplogroup)。近年来，随着大规模平行测序发展，越来越多的SNP位点被发现，这些遗传标记通过构建单倍群，形成人类Y染色体进化树，进而研究人类进化和群体结构。法医学家和人类学家可以通过对检案中未知来源的男性样本进行单倍群划分以判断其所属的群体或者地理来源。已经构建的Y染色体遗传标记中，大部分是基于全球人类Y染色体进化树中定义的群体特异性SNP，主要用于区分全世界各大洲的人群，因此并不具有较高的分辨率。中国是一个拥有56个民族具有群体结构差异的国家，因此针对各群体或地区，构建一个具有稳定的、较高分辨率的系统发育树，进而为法医学检案提供辅助作用具有十分重要的意义。

目前关于SNP检测的技术有很多，如SNaPshot、焦磷酸测序、大规模平行测序等。大规模平行测序虽然可以发现更多的SNP，但是其成本较高，操作复杂。SNaPshot、焦磷酸测序等无法进行多样本、大量SNP位点的连续性检测。在法医学领域，单碱基延伸技术已被广泛应用于SNP遗传标记的检测。该发明通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)进行检测，具有成本低，高通量、自动化检测等方面的优势，适用于多样本、多Y-SNPs的自动批量化检测。

因此，本领域迫切需要开发一种针对中国人群的、高分辨率的用于法医学溯源的技术手段。

发明内容

本发明的目的就是提供一种针对中国人群的、高分辨率的用于法医学溯源的技术手段。