[发明专利]识别链格孢菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株AaC5

说明书

本发明公开了一种识别链格孢菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株，所述识别链格孢菌的单克隆抗体，由保藏编号为：CCTCC No：C2019249的杂交瘤细胞株分泌产生；所述杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株AaC5，于2019年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No：C2019249。该单克隆抗体被用于由链格孢菌侵染引发的动植物病害的鉴定、动态监测以及链格孢菌的生物学研究，通过BaLb/c小鼠腹腔注射该细胞株，即可获得大量的该单克隆抗体，与多克隆抗体相比，具有纯度高，专一性强，重复性好等优点。

技术领域

本发明属于动物领域，特别涉及一种识别链格孢菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株AaC5。

背景技术

半知菌亚门链格孢属真菌链格孢菌Alternaria alternata是贝母黑斑病的病原真菌之一。病菌以菌丝随病残组织遗落在土中越冬，第二年再次侵染贝母。链格孢菌也是众多农作物的黑斑病的致病菌，每年给农业生产造成严重损失。而链格孢属真菌种类繁多，近缘种的菌落、菌丝和孢子形态相似，难以依靠上述特征加以区分。本发明公开的针对链格孢菌的单克隆抗体(单抗)结合酶联免疫吸附试验(ELISA)由于具有灵敏度高、特异性强、适于大量检测田间链格孢菌的特点，为应用该抗体进行链格孢菌的鉴定和生物学研究，由链格孢菌感染的病害如浙贝母黑斑病等的发生动态监测奠定基础。

发明内容

本发明提供了一种识别链格孢菌的单抗，由保藏编号为：CCTCC No：C2019249的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株AaC5，于2019年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCC No：C2019249。

本发明具有如下有益效果：

(1)单抗的特异性强：该单抗与链格孢菌抗原反应强，且不与细极链格孢、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、木贼镰刀菌、半裸镰刀菌、灰葡萄孢菌、茎点霉菌、拟茎点霉菌的抗原发生反应，可用于链格孢菌及其引发的浙贝母黑斑病的检测。

(2)单抗的检测灵敏度高：采用间接ELISA检测结果表明，该单抗对链格孢菌菌丝及孢子制备的抗原的检测灵敏度为24.42ng/mL(即每孔2.442ng)，具有良好的开发应用前景。

(3)单抗的类型为IgG3。

(4)单抗结合的目标蛋白单一：该单抗仅与链格孢菌约66kDa的抗原蛋白结合。

(5)浙贝母提取液对单抗的检测灵敏度无影响：该单抗对浙贝母蛋白提取液无存在交叉反应；在链格孢菌菌丝及孢子制备的抗原中加入浙贝母蛋白提取液后，浙贝母提取液对单抗的检测灵敏度无影响，为24.42ng/mL(即每孔2.442ng)，具有良好的开发应用前景。

附图说明

图1AaC5的效价检测；

图2AaC5与不同真菌抗原的反应；

图3AaC5的检测灵敏度测定；

图4AaC5的类型及亚类鉴定；

图5AaC5结合的目标蛋白检测；

图6浙贝母提取液对AaC5的检测灵敏度的影响。

具体实施方式

以下结合附图和实施例进一步解释本发明。

实施例1：杂交瘤细胞株制备