[发明专利]一种肿瘤标志物Cyfra21-1的Simoa试剂盒及其应用

说明书

本发明属于免疫检测技术、肿瘤检测领域，特别是指一种肿瘤标志物Cyfra21‑1的Simoa试剂盒及其应用。所述Simoa试剂盒包括捕获抗体包被的磁珠、Cyfra21‑1标准品、生物素化的检测抗体、SBG溶液、荧光底物溶液和样本稀释液。本发明提供的基于Simoa平台和双抗夹心法检测人血清中Cyfra21‑1蛋白含量的Simoa试剂盒，不仅可以定性还可以定量的检测人血清中Cyfra21‑1含量；具有高灵敏度、高通量、较少样本量、自动化、花费时间短、操作简便、检测范围宽等特点。

技术领域

本发明属于免疫检测技术、肿瘤检测领域，特别是指一种肿瘤标志物Cyfra21-1的Simoa试剂盒及其应用。

背景技术

CK19是细胞角蛋白I型酸性亚族成员之一，在许多人类组织中的都有表达。然而，CK19容易被蛋白酶降解成许多片段。Cyfra21-1是细胞角蛋白CK19在血清中相对稳定的一个可溶性片段。研究表明，血清中Cyfra21-1浓度介于1-10ng/mL，可以作为诊断NSCLC的一种方式，然而常规ELISA试剂盒的最低检测限在1-10ng/mL，这就造成了检测结果误差就大，重复性差。另有研究表明，带有NSCLC病人的血清Cyfra21-1浓度明显高于健康人。病人接受治疗后，随着病情好转，Cyfra21-1浓度会不同程度的降低。基于此，Cyfa21-1在血清中的额浓度可以作为临床医生在NSCLC中的诊断指标。而ELISA试剂盒无法实现准确检测血清中Cyfa21-1的额浓度。

肿瘤标志物的发现和定量检测对癌症的早期诊断和预后评估起到了越来越重要的作用。血清Cyfra21-1与CEA一起已经被广泛用于NSCLC的诊断和预后评估。研究表明，带有NSCLC病人的血清Cyfra21-1浓度明显高于健康人。病人接受治疗后，随着病情好转，Cyfra21-1浓度会不同程度的降低。基于此，Cyfa21-1在血清中的额浓度可以作为临床医生在NSCLC中的诊断指标。

目前临床上使用的Cyfra21-1检测方法主要是比色免疫分析法、化学发光免疫分析法、放射免疫分析法和电化学发光免疫分析法。其中，比色免疫分析法是最常见的一种方法。但是该方法灵敏度较低，耗时长，样本量需求大，不利于对病情的持续观察。其它三种方法可以快速、灵敏地检测出结果，但是这些方法重复性差，变异系数大。放射免疫分析法对操作人员还可能存在潜在的健康风险。Simoa是基于泊松分布原理和单分子技术发展起来的数字化超灵敏检测蛋白标志物的技术平台。该平台采用经典ELISA双抗夹心的方法，可以将带有单个待测蛋白的免疫磁珠载入到约46飞升的微孔中进行荧光成像。通过对发光的微孔进行计数，该平台可以对蛋白进行定性定量检测。

Simoa是基于泊松分布原理和单分子技术发展起来的数字化超灵敏检测蛋白标志物的技术平台。该平台采用经典ELISA双抗夹心的方法，可以将带有单个待测蛋白的免疫磁珠载入到约46飞升的微孔中进行荧光成像。通过对发光的微孔进行计数，该平台可以对蛋白进行超灵敏定量检测。

因此，基于Simoa技术开发一种高灵敏度、自动化程度高、快速、准确性好且适合推广的Cyfra21-1检测方法，对快速检测肿瘤标志物Cyfra21-1具有重大的意义。

发明内容

本发明提出一种肿瘤标志物Cyfra21-1的Simoa试剂盒及其应用，以便解决现有技术中操作复杂、样本量需求大及灵敏度不足等技术问题。本专利的操作简单便捷、高通量、灵敏度高、样本量少适合用于大规模的筛查。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种肿瘤标志物Cyfra21-1的Simoa试剂盒，所述Simoa试剂盒包括捕获抗体包被的磁珠、Cyfra21-1标准品、生物素化的检测抗体、SBG溶液、荧光底物溶液和样本稀释液。

所述捕获抗体包被的磁珠的制备方法为：

（1）将捕获抗体通过超滤管进行换液处理；