[发明专利]一种椰枣的愈伤组织诱导培养方法

说明书

本发明提供了一种椰枣的愈伤组织诱导培养方法，属于植物组织培养技术领域。一种椰枣的愈伤组织诱导培养方法，包括以下步骤：将消毒后的椰枣外植体接种至愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养；将得到的愈伤组织转接到胚性愈伤组织培养基中进行胚性愈伤组织培养；两次培养条件为暗培养，培养温度24～29℃，湿度为55％～68％，每50～70天继代一次；椰枣外植体包括椰枣种子合子胚、椰枣分蘖苗或椰枣幼苗的茎尖分生组织和嫩叶。本发明提供的方法，操作简单，成本低，效率高，有利于后期规模化生产的应用。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种椰枣的愈伤组织诱导培养方法。

背景技术

椰枣树(Phoenix dactylifera L.)是多年生雌雄异株棕榈植物，是一种重要的木本粮食作物，适应于干旱和半干旱环境。椰枣可以通过种子进行有性繁殖，也可以通过分蘖苗进行无性繁殖，然而这两种繁殖方式在经济上效率低下，不满足大量种植需求，也不能满足选择优良基因型进行繁殖扩增的需要，植物组织培养技术可以克服这些困难。

目前，我国椰枣组织培养技术研究较少，椰枣作为棕榈科植物之一，与草本植物相比，存在诱导愈伤组织困难，且所需诱导时间长的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种提早愈伤组织形成时间，提高愈伤诱导率的椰枣的愈伤组织诱导培养方法。

本发明提供了一种椰枣的愈伤组织诱导培养方法，包括以下步骤：

1)将消毒后的椰枣外植体接种至愈伤组织诱导培养基上愈伤组织诱导培养；

所述愈伤组织诱导培养的条件为暗培养，培养温度24～29℃，湿度为55％～68％，每50～70天继代一次；

所述愈伤组织诱导培养基为以4.43g/L复合维生素的MS培养基为基础培养基，还包括70～120mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0～50mg/L麦草畏、60～100mg/L肌醇、3～5g/L植物凝胶、2.5～4g/L活性炭、40～50mg/L维生素C、40～50mg/L柠檬酸和25～35g/L蔗糖，其中2,4-二氯苯氧乙酸和麦草畏的总浓度为120mg/L；灭菌前的愈伤组织诱导培养基的pH值为5.65～5.8；

2)将得到的愈伤组织转接到胚性愈伤组织培养基中进行胚性愈伤组织培养；

所述胚性愈伤组织培养的条件为暗培养，培养温度24～29℃，湿度为55％～68％，每50～70天继代一次；

所述胚性愈伤组织培养基是以4.43g/L复合维生素的MS培养基为基础培养基，包括7～10mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0～3mg/L麦草畏、60～100mg/L肌醇、100～200mg/L酸水解酪蛋白、3～5g/L植物凝胶、2.5～4.5g/L活性炭和25～35g/L蔗糖，其中2,4-二氯苯氧乙酸和麦草畏的总浓度为10mg/L；灭菌前培养基pH值为5.65～5.8。

优选的，所述椰枣外植体包括椰枣种子合子胚、椰枣分蘖苗或椰枣幼苗的茎尖分生组织和嫩叶。

优选的，所述椰枣种子合子胚在消毒前进行切割处理，所述切割的方法包括以下步骤：

成熟椰枣果去除果肉，清洗，晾干，去除包裹在种子表面的内果皮和种子表皮，得到的椰枣种子剪掉两端，剪后两端分别距离发芽孔的距离为0.15～0.25cm，将含有种子棱状的一边从中间剪掉，留有包裹胚，剪后椰枣种子的形状为正方体，得到椰枣种子合子胚。

优选的，所述椰枣种子合子胚、椰枣分蘖苗或椰枣幼苗的消毒方法包括以下步骤：