[发明专利]非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒

说明书

本申请提供非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒，涉及动物传染病检测领域，具体涉及非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒。非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒，包括采用重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白PS273R包被的酶标板，所述重组多肽串联蛋白R10的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述重组蛋白PS273R的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒能够快速、准确、高特异性地对非洲猪瘟病毒抗体进行检测。

技术领域

本发明涉及动物传染病检测领域，具体涉及非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪科动物和蜱类是ASF的易感动物，其中家猪高度易感，死亡率高达100％，无明显的品种、年龄和性别差异。ASFV基因组包括160～175个开放阅读框，编码150～200种蛋白质。

目前，ASF没有有效的疫苗可用于预防，抗体检测为阳性即表明动物已经或曾经感染了病毒。随着ASFV入侵我国后大规模的蔓延，ASF很可能成为我国的又一常在的主要猪病，因此抗体检测在该病的控制和诊断中具有重要意义。现有技术中，还没有可以高效检测非洲猪瘟抗体的试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒，该试剂盒能够快速、准确、高特异性地对非洲猪瘟病毒抗体进行检测。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒，包括采用重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白PS273R包被的酶标板，所述重组多肽串联蛋白R10的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述重组蛋白PS273R的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

在本发明中，所述重组多肽串联蛋白R10的包被浓度为0.6～20μg/ml，所述重组蛋白PS273R的包被浓度为0.6～20μg/ml。

优选的技术方案中，所述重组多肽串联蛋白R10的包被浓度为1～1.5μg/ml，所述重组蛋白PS273R的包被浓度为2～3μg/ml。

在本发明中，所述重组多肽串联蛋白R10采用如下方法制备：将重组多肽串联蛋白R10基因插入载体pET-28a(+)中，然后转化大肠杆菌，诱导表达后纯化，得到重组多肽串联蛋白R10。

在本发明中，所述重组蛋白PS273R采用如下方法制备：将重组蛋白PS273R基因插入载体pET-21a(+)中，然后转化大肠杆菌，诱导表达后纯化，得到重组蛋白PS273R。

在本发明中，所述试剂盒还包括非洲猪瘟阳性对照血清、非洲猪瘟阴性对照血清的制备、样品稀释液、HRP-羊抗猪IgG酶标抗体、TMB底物显色液和终止液。

在本发明中，所述样品稀释液为0.5-1.5％脱脂乳溶液。

本发明通过将重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白PS273R组合包被酶标板，建立了MP-ELISA抗体检测试剂盒。其制造成本低廉，检测速度快，敏感性和特异性分别高达96.58％和98.61％，非常适用于ASFV的血清学的准确诊断和流行病学调查。

附图说明

图1是纯化后的重组多肽串联蛋白R10的SDS-PAGE电泳图，其中M：ProteinMarker；1：纯化后的重组多肽串联蛋白R10。

图2是纯化后的重组蛋白PS273R的SDS-PAGE电泳图，M：Protein Marker；1：纯化后的重组蛋白PS273R。