[发明专利]一种利用木醋液对土壤中抗生素抗性基因的削减方法及应用

权利要求书

1.一种木醋液在抗生素抗性基因污染土壤削减中的应用，其特征在于，

所用木醋液制备包括如下步骤：

1)厌氧慢速热解法制备木醋原液WV：将植物原料干燥至恒重，采用热解炭化炉热解植物原料制备木醋液，热解温度350℃-550℃，热解时间3h-6h，热解过程中所产生的气体经过冷凝，得到棕黑色且有刺鼻性气味的液体，然后在黑暗中静置3-6个月，取中间液体过微孔滤膜，即得木醋原液WV；

2)常压蒸馏法精制木醋原液WV：常压状态下，设置15℃-98℃低温温度段，加热蒸馏装置，采集该温度段的产物，得到精馏组分为15℃-98℃低温度段精馏组分F1，木醋原液WV或精馏组分F1分别作为所需木醋液；

具体的，将木醋原液WV或精馏组分F1分别作为土壤改良剂施用于抗生素抗性基因污染土壤中；

其中，应用木醋原液WV处理降低磺胺类、氨基糖苷类或大环内酯类抗生素抗性基因sul1，sul2，ermF,ermB，aadA5或strA，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用木醋原液WV或精馏组分F1，处理降低tetO类抗生素抗性基因，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用木醋原液WV，处理去除根际和非根际土壤的可移动遗传原件；

可移动遗传原件为intI1或Tn916/1545。

2.一种木醋液中温温度段精馏组分在抗生素抗性基因污染土壤削减中的应用，其特征在于，

所用木醋液中温温度段精馏组分制备包括如下步骤：

1)厌氧慢速热解法制备木醋原液WV：将植物原料干燥至恒重，采用热解炭化炉热解植物原料制备木醋液，热解温度350℃-550℃，热解时间3h-6h，热解过程中所产生的气体经过冷凝，得到棕黑色且有刺鼻性气味的液体，然后在黑暗中静置3-6个月，取中间液体过微孔滤膜，即得木醋原液WV；

2)常压蒸馏法精制木醋原液WV：常压状态下，设置98℃-130℃中温温度段，加热蒸馏装置，采集该温度段的产物，得到精馏组分为98℃-130℃中间温度段精馏组分F2，即为所需木醋液中温温度段精馏组分；

具体的，将木醋液精馏组分F2作为土壤改良剂施用于抗生素抗性基因污染土壤中；

其中，应用精馏组分F2处理降低磺胺类、氨基糖苷类或大环内酯类抗生素抗性基因sul1，sul2，ermB，aadA5或strA，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用精馏组分F2，处理降低tetO类抗生素抗性基因，在根际和非根际土壤中的绝对丰度。

3.一种木醋液高温度段精馏组分在抗生素抗性基因污染土壤削减中的应用，其特征在于，

所用木醋液高温度段精馏组分制备包括如下步骤：

1)厌氧慢速热解法制备木醋原液WV：将植物原料干燥至恒重，采用热解炭化炉热解植物原料制备木醋液，热解温度350℃-550℃，热解时间3h-6h，热解过程中所产生的气体经过冷凝，得到棕黑色且有刺鼻性气味的液体，然后在黑暗中静置3-6个月，取中间液体过微孔滤膜，即得木醋原液WV；

2)常压蒸馏法精制木醋原液WV：常压状态下，设置130℃-220℃高温温度段，加热蒸馏装置，采集该温度段的产物，得到精馏组分为130℃-220℃高温度段精馏组分F3，即为所需木醋液高温度段精馏组分；

具体的，将精馏组分F3作为土壤改良剂施用于抗生素抗性基因污染土壤中；

其中，应用精馏组分F3处理降低磺胺类、氨基糖苷类或大环内酯类抗生素抗性基因sul1，sul2，ermF,ermB，aadA5或strA，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用木醋液精馏组分F3，处理去除根际和非根际土壤的可移动遗传原件；

可移动遗传原件为intI1或Tn916/1545。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，将木醋原液WV以及精制所得精馏组分F1或F2或F3分别施用于菌液培养基中，测定各类木醋液的抑菌性，按如下公式计算抑菌率：

抑菌率(％)＝(处理组抑菌圈直径–对照组抑菌圈直径)/处理组抑菌圈直径×100％；和/或

将木醋原液WV及其精馏组分F1或F2或F3分别通过高效气相色谱-质谱联用测定进行组分分析，然后用每个峰谱的面积除以所有峰的总面积获得相对丰度面积计算每种物质的相对含量。