[发明专利]TGFBI作为调控间充质干细胞成脂分化的标志物的应用

权利要求书

1.TGFBI抑制剂在制备抑制脐带来源的间充质干细胞成脂分化的产品中的应用，其特征在于，所述TGFBI抑制剂通过PPAR-γ信号通路调节脐带间充质干细胞成脂分化；通过敲低所述TGFBI基因使得成脂关键转录因子PPAR-γ和晚期成脂分化标志基因Adi的表达明显下调，从而抑制脐带间充质干细胞成脂分化能力。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述TGFBI抑制剂为能降低TGFBI表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸的构建物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述TGFBI抑制剂为抑制脐带间充质干细胞成脂分化的TGFBI siRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2所示。

4.一种抑制脐带间充质干细胞成脂分化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)从人脐带组织分离获取间充质干细胞，使用α-MEM+10%胎牛血清的完全培养基进行原代培养和传代培养；

2)利用转染试剂jetPRIME reagent将TGFBI siRNA导入传代培养后的脐带间充质干细胞，所述siRNA瞬时转染的转染体系为：jetPRIME reagent buffer 200μl/2ml、siRNA 3μl/2ml、jetPRIME reagent 4μl /2ml，转染时间为24h；然后培养；

3)分别将未转染的正常huMSC和TGFBI基因敲低的huMSC接种至6孔板，其中huMSC自分化组为2x10⁴/孔、诱导组为8x10^4/孔；TGFBI^-/-huMSC自分化组为5x10⁴/孔、诱导组为8x10⁴/孔；向诱导组加入成脂诱导培养基，所述成脂诱导培养基为90% α-MEM培养基+10%FBS+胰岛素、地塞米松和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，自分化组则仅加入完全培养基，每2-3天全量换液，诱导时间大约为14天，其中TGFBI-/-huMSC在第7天再次转染TGFBI siRNA；诱导结束加入多聚甲醛固定，用油红O染色观察评价各组细胞出现脂滴数量，q-PCR检测成脂关键转录因子表达变化。