[发明专利]紫杉肽中有关物质DMAP的检测方法

说明书

本发明公开了紫杉肽中有关物质DMAP的检测方法，采用高效液相色谱法，使用WondaCractODS‑2C18色谱柱(4.6*150mm)，以乙腈：1ml/L磷酸水溶液(0.2％三乙胺，磷酸调pH2.0)＝3‑20：80‑97为流动相，流速为1.0ml/min，稀释剂为1ml/L磷酸，柱温为30℃，使用紫外检测器，在波长276nm进行测定。实验测得DMAP加标回收率为99.2％，变异系数为1.03％，线性相关系数R2＝0.9999，检测灵敏度可达到0.06ng。本发明选用的流动相可以增长目标化合物在色谱柱上的保留时间，提高目标化合物的分离度，选用的稀释剂可使检测结果更加稳定。本发明操作简单，结果可靠，可实现紫杉肽中DMAP残留的快速、低成本检测。

技术领域

本发明涉及药物组分析及检测技术领域，具体属于药物杂质控制分析领域，具体涉及紫杉肽中有关物质DMAP的检测方法。

背景技术

紫杉肽是通过紫杉醇与多肽药物载体以化合的形式结合而成，与紫杉醇相比紫杉肽的水溶性大大提高，体内清除速度慢，在肿瘤内的聚集度强，从而降低了脱发、呕吐、过敏反应等副作用，在临床使用过程中不需要预防性使用抗过敏药物。中国专利CN1148227C公开了一种治疗化合物即紫杉肽，该化合物是由紫杉醇和天冬氨酸与谷氨酸形成的多肽药物载体化合结合而成。合肥安德生制药有限公司继续延续中国专利CN1148227C公开了一种治疗化合物即紫杉肽的开发和研究，该CN1148227C专利的技术研究的知识产权隶属于合肥安德生制药有限公司。且合肥安德生制药有限公司开发的紫杉肽目前已完成临床Ⅱ期试验，是非常具有前景的抗癌药物。

紫杉肽是一种大分子多肽，容易在生产过程中受到温度、酸碱及有机溶剂的影响，造成不同程度的变形而影响其纯度。在传统的多肽生产工艺中，一般使用大量的有机溶剂脱水、真空干燥。该干燥工艺不仅具有有机溶剂残留的风险，且在常温下干燥时间较长，干燥期间温度及干燥时间也会影响紫杉肽的生物活性及纯度，特别是游离紫杉醇，游离紫杉醇对人体的副作用比较强。所以，其制备工艺对其保质期和产品质量有着巨大影响，冻干工艺和冻干参数的选择对紫杉肽的性质也有明显影响。在紫杉肽的制备过程中，使用有机溶剂，有机溶剂的残留会影响药物的安全性、稳定性等，因此要控制药物中的各种残留有机溶剂。

DMAP，中文名是4-二甲氨基吡啶，英文名：4-dimethylaminopyridine；DMAPY，是一种超强亲核的酰化作用催化剂。近年来广泛用于化学合成的新型高效催化剂，在有机合成，药物合成，农药，医药，染料，香料，高分子化学，分析化学中的酰化，烷基化，醚化，酯化及酯交换等多种类型的反应中有较高的催化能力，对提高收率有极其明显的效果。国内化学制药行业已成功将其应用于乙(丙)酰螺旋霉素，青蒿素琥珀酸酯，紫杉肽等原料药的生产中，改善了工艺条件，并取得良好的经济和社会效益。但是，DMAP本身具有高毒性和刺激性，可损伤眼睛、皮肤、呼吸系统、消化道、神经系统等，危害人体健康。因此检测并控制紫杉肽药物中DMAP的含量，对于保障多肽类药物的安全使用具有至关重要的作用，因此规定紫杉肽原料药中DMAP的限量为0.15％。

发明内容

本发明的目的在于：提供紫杉肽中有关物质DMAP的检测方法，实现紫杉肽中DMAP残留的快速、低成本检测。本发明是申请号为CN00105625.5，发明名称为：治疗化合物及其应用的后续研究，本申请所述的紫杉肽同申请CN00105625.5的治疗化合物相同，实际是相同物质。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

紫杉肽中有关物质DMAP的检测方法，采用高效液相色谱法，使用WondaCractODS-2色谱柱(5um4.6*150mm)，柱温为25-35℃，以乙腈-1ml/L磷酸水溶液(0.2％三乙胺，磷酸调pH2.0)为流动相，所述流动相中乙腈-1ml/L磷酸水溶液(0.2％三乙胺，磷酸调pH2.0)的体积比为3-20:80-97。

本发明选用的流动相可以增长目标化合物在色谱柱上的保留时间，提高目标化合物的分离度。选用的稀释剂可使检测结果更加稳定。