[发明专利]一种甲胎蛋白免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种甲胎蛋白免疫层析试纸条及其制备方法和应用，所述甲胎蛋白免疫层析试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫和背衬板，所述结合垫上结合有复合荧光微球探针，所述复合荧光微球探针为甲胎蛋白单克隆抗体与碳纳米管以及水溶性量子点形成的微球探针，所述硝酸纤维素膜上检测线和质控线，其中检测线上含有甲胎蛋白抗体，所述质控线上含有羊抗鼠IgG。本发明的甲胎蛋白免疫层析试纸条制备方法简单、易操作，所述甲胎蛋白免疫层析试纸条用于甲胎蛋白检测荧光强度显著增强，检测准确，灵敏度明显增强，最低检测限为0.02ng/mL。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，涉及一种甲胎蛋白免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

原发性肝癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，其在全球的发病率呈上升趋势，对于原发性肝癌的准确诊断对于肝癌的治疗具有重要意义。

甲胎蛋白是诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标，目前，对甲胎蛋白的检测主要采用免疫测定法，CN103558396A公开了一种甲胎蛋白的定量检测方法，该方法由以下步骤组成：(1)将甲胎蛋白抗体与醛化糖化酶溶液混合制备酶标抗体；将甲胎蛋白抗体负载到纳米金磁微粒上；(2)甲胎蛋白抗原样品和一系列不同浓度的甲胎蛋白抗原标准品加入到负载抗体的纳米金磁微粒的免疫反应界面中进行温育，然后用血糖仪测得葡萄糖浓度，从而得到甲胎蛋白浓度与葡萄糖浓度对应关系的线性方程，最后将甲胎蛋白抗原样品的葡萄糖浓度值代入线性方程中换算出甲胎蛋白抗原样品的甲胎蛋白浓度。

CN108709914A公开了一种快速检测甲胎蛋白的方法，所述方法首先在纸基材料上涂覆单臂碳纳米管甲胎蛋白抗体分散液，利用甲胎蛋白与其抗体特异性结合的特点，根据抗体和抗原结合前后纸基传感器的电阻变化，则定纸基碳纳米管传感器的电阻，通过记录一定时间内传感器电阻的变化，来对目标抗原含量进行测定实现对甲胎蛋白的检测。

这些检测方法虽然能够实现甲胎蛋白的检测，但是其操作复杂，时间成本也比较大，因此，在本领域中，期望能够开发一种简单且能够快速检测甲胎蛋白的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种甲胎蛋白免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种甲胎蛋白免疫层析试纸条，所述甲胎蛋白免疫层析试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫和背衬板，所述结合垫上结合有复合荧光微球探针，所述复合荧光微球探针为甲胎蛋白单克隆抗体与碳纳米管以及水溶性量子点形成的微球探针，所述硝酸纤维素膜上检测线和质控线，其中检测线上含有甲胎蛋白抗体，所述质控线上含有羊抗鼠IgG。

在本发明中，以甲胎蛋白单克隆抗体与碳纳米管以及水溶性量子点形成的微球探针开发出的甲胎蛋白免疫层析试纸条，以碳纳米管为核心，偶联有水溶性量子点以及甲胎蛋白单克隆抗体，碳纳米管表面结合大量的水溶性量子点，使得荧光强度显著增强，这样的试纸条其检测甲胎蛋白的灵敏度明显增强。

优选地，所述碳纳米管为多壁碳纳米管或者单壁碳纳米管。

优选地，所述水溶性量子点为羧基包覆的CdTe量子点或羧基包覆的CdTe/ZnSe核壳量子点。

在本发明中，所述羧基包覆的CdTe量子点或羧基包覆的CdTe/ZnSe核壳量子点可以通过现有技术制备得到。

优选地，所述复合荧光微球探针的制备方法为：将氨基化碳纳米管与甲胎蛋白单克隆抗体在缩合剂的作用下37℃孵育，离心，将离心后的沉淀物复溶，加入缩合剂及羧基化水溶性量子点，37℃孵育，离心，得到所述复合荧光微球探针。

优选地，所述氨基化碳纳米管与甲胎蛋白单克隆抗体在缩合剂的作用下37℃孵育时，所用的缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的任意一种或至少两种的组合。