[发明专利]一种肺炎链球菌疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物制品领域，公开了一种肺炎链球菌疫苗，包括SPD_0151蛋白和免疫佐剂，所述SPD_0151蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。所述SPD_0151蛋白的制备方法，包括以下步骤：在重组质粒中插入不含信号肽序列的spd_0151基因，导入表达菌，诱导表达，纯化，制得SPD_0151蛋白；所述spd_0151基因的序列为SEQ ID NO.2。所述肺炎链球菌疫苗对不同亚型的肺炎链球菌菌株的攻毒都有良好的保护作用，可有效增强对肺炎链球菌的抵抗力。

技术领域

本发明属于生物制品领域，特别涉及一种肺炎链球菌疫苗及其制备方法。

背景技术

肺炎链球菌属于革兰氏阳性菌，常常寄居于正常人的口腔及鼻咽部，一般不致病，只形成带菌状态，只有在免疫力下降时才致病。肺炎链球菌是社区获得性肺炎最常见的致病菌之一，该细菌也会导致许多其他严重疾病，包括脑膜炎、中耳炎、菌血症和败血症等，特别是在儿童、老年人、艾滋病患者和其他免疫缺陷患者中，对全世界的人类健康构成重大威胁。

而疫苗和抗生素是目前预防和治疗肺炎链球菌感染疾病的主要手段。目前市面上的肺炎链球菌疫苗主要是23价肺炎球菌多糖疫苗PPV23和13价肺炎球菌多糖结合疫苗PCV13。PPV23是目前唯一用于预防2岁以上儿童及高危人群感染肺炎链球菌的多糖疫苗，但是PPV23不能诱导2岁以下的婴幼儿产生保护性抗体；而接种PCV13虽然能用于预防5岁以下儿童的肺炎链球菌感染相关的疾病，但是其覆盖的血清型有限。

而目前分离出的肺炎链球菌已有92个血清型，因此非疫苗血清型肺炎球菌感染性疾病的增加使得研究者开始关注其他方向肺炎球菌疫苗的开发，其中开发存在于所有血清型中肺炎链球菌毒力蛋白和脂蛋白抗原成为研究的热点，如肺炎链球菌溶血素(Ply)、肺炎链球菌表面蛋白(PspA)、肺炎链球菌黏附素A(PsaA)、肺炎链球菌铁摄取脂蛋白PiaA和PiuA等。

因此，不断开发和研究新型肺炎链球菌抗原，对于制备效果更好的肺炎链球菌疫苗具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种肺炎链球菌疫苗及其制备方法。所述肺炎链球菌疫苗对不同亚型的肺炎链球菌菌株的攻毒都有良好的保护作用，可有效增强对肺炎链球菌的抵抗力。

在革兰氏阳性菌中，脂蛋白是一类具有多种生物学功能的、重要的膜锚定蛋白，通常含有由18～36个氨基酸组成的信号肽。ABC转运系统的底物结合蛋白都是典型的脂蛋白，而且脂蛋白还具有参与营养物质吸收、信号转导、黏附、接合、孢子形成、参与抗生素抗性、细胞质外蛋白质的折叠、参与黏附宿主细胞、调节炎症进程、将毒力因子转入宿主细胞中等功能。由于脂蛋白是暴露在细胞膜外的，是许多革兰氏阳性菌所必需的毒力因子，而且人宿主细胞中不存在这些脂蛋白的同源蛋白，因此脂蛋白可成为这些细菌引发的感染性疾病的疫苗候选物和药物靶标。

一种肺炎链球菌疫苗，包括SPD_0151蛋白和免疫佐剂，所述SPD_0151蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

所述SPD_0151蛋白属于肺炎链球菌脂蛋白的一种，其中SEQ ID NO.1序列中不包含信号肽序列。试验表明，所述SPD_0151蛋白属于大分子蛋白质，具有较强的免疫原性，可诱导产生免疫应答。因此，所述肺炎链球菌抗原可应用于肺炎链球菌疫苗的制备。

通过对肺炎链球菌各亚型的基因序列进行分析比对，表明spd_0151基因在肺炎链球菌的各种亚型中均高度保守，序列重复度最低为98.94％，最高可达99.65％。因此使用SPD_0151蛋白制得的疫苗应对所有肺炎链球菌亚型具有类似的保护效果。

优选的，所述SPD_0151蛋白的浓度为20～200μg/mL。

优选的，所述免疫佐剂的浓度为0.2～1mg/mL。

优选的，所述免疫佐剂包括弗氏佐剂、铝佐剂或脂质体中的至少一种。