[发明专利]无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和配体筛选方法

说明书

本发明涉及一种无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和筛选方法，具体地说是涉及一种精氨酸加压素受体的亚型(V1a受体)，用无标记细胞动态质量重置技术在不同细胞系上进行模型建立和配体筛选。本发明所述V1a受体模型在内源性表达V1a受体的HEK293细胞系和转染的CHO‑V1a细胞系上分别构建。该方法具有接近体内真实环境、无标记、实时监测、通量高、操作简单的特点，可以筛选具有V1a受体活性的配体，包括激动剂和拮抗剂。

技术领域

本发明属于药理学研究及药物筛选研究领域，具体涉及精氨酸加压素 受体的亚型，即精氨酸受体1a亚型(V1a)受体的在内源细胞和转染细胞上的 模型建立，本发明还涉及V1a受体的配体筛选方法。

背景技术

精氨酸加压素(AVP)是由下丘脑的视上核和室旁核细胞产生的一种9 肽环状激素，贮存于神经垂体，通过与精氨酸加压素受体(AVPR)作用， 介导调节循环和水平衡等一系列生理作用。精氨酸加压素受体属于G蛋白 偶联受体中的视紫红质A类家族，根据传导机制的不同，精氨酸加压素受 体在人体内有三种亚型:V1a、V1b和V2。V1a受体主要分布于血管平滑肌 细胞、血小板、肝细胞和子宫肌层，可通过与精氨酸加压素的结合，介导 动脉血管收缩和血管内皮生长因子的释放。V1b受体主要分布于垂体前叶， 介导促肾上腺皮质激素(ATCH)的释放。V2受体位于肾脏集合管细胞，主 要参与调节集合管对水的通透性。AVPR还参与了雷诺氏综合征、痛经、早 产、焦虑症、抑郁症等过程。因此，AVPR抑制剂一直是药物研究的热点。 在最近的研究中，V1a受体拮抗剂对于心脏衰竭的治疗表现出较好的作用。2019年，研究人员发现V1a受体能够有助于激活参与前列腺癌中去势抗性 产生的信号通路，可作为去势抵抗的前列腺癌的治疗靶点。以V1a受体为 靶点的代表药物有考尼伐普坦(YM078)、瑞考伐普坦(Relcovaptan)，目前 用于治疗等溶性低钠血症，但在长期用药的安全性评价中，存在一定的弊 端。因此，对新型高效安全的非肽类V1a受体拮抗剂的研究和发现对生命 医学研究和药物发展都有重要的意义(Zhao,N.,Peacock,S.O.,Lo,C.H.,Heidman,L.M.,Rice,M.A.,Fahrenholtz,C.D.et al.(2019).Arginine vasopressinreceptor 1a is a therapeutic target for castration-resistant prostate cancer.Science Translational Medicine,11(498)；Koshimizu,T.-a.,Nakamura,K., Egashira,N.,Hiroyama,M.,Nonoguchi,H.,Tanoue,A.(2012).VASOPRESSIN V1a AND V1bRECEPTORS:FROM MOLECULES TO PHYSIOLOGICAL SYSTEMS. Physiological Reviews,92(4),1813-1864；Birnbaumer,M.(2000).Vasopressin receptors.Trends inEndocrinology and Metabolism,11(10),406-410； Greenberg,A.,Verbalis,J.G.(2006).Vasopressin receptor antagonists.Kidney International,69(12),2124-2130.)。