[发明专利]一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌及其发酵液和应用

说明书

本发明提供了一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌及其发酵液和应用，所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌于2019年11月4号，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号CGMCC N0.18794。本发明的耐铜锌的盐酸土霉素降解菌具有很好的耐四环素类抗生素、氯霉素和铜锌离子的能力，能在抗生素与铜或锌离子交叉的平板上生长，扩大了本发明降解菌的使用空间。而且，铜离子的存在还提高了对盐酸土霉素降解率。另外，本发明耐铜锌的盐酸土霉素降解菌与萝卜具有亲和性，可促进萝卜种子生长，提高产量，可作为生物肥料。

技术领域

本发明属于污染物微生物降解技术领域。具体涉及一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌及其发酵液和应用，用于修复抗生素污染，还能促进植物生长，尤其是萝卜的生长。

背景技术

盐酸土霉素是四环素类抗生素的一种，常被用来作为治疗、预防人类和动物医学疾病的药物，或者作为提高农畜生长速率的饲料添加剂。因为其使用量大，残留危害严重，在国内外，土壤、水产养殖、地下水、蔬菜，牛奶中都有监测到盐酸土霉素的残留。它的残留会导致产生大量耐药菌和抗性基因，同时会对土壤微生物活性和菌落结构、植物生长产生影响。

铜锌离子作为饲料中常用的添加剂，在畜禽体内利用率低，会随畜禽粪便排到环境中，它常和抗生素一起添加到饲料中，这进一步增加了抗生素抗性基因的扩大、稳定和传播。比如，于浩筛选出一株能降解盐酸土霉素的短波单菌属，但是该菌在添加1g/L的铜离子的条件下，降低了菌株的降解率。而且，有研究表明盐酸土霉素、铜锌离子等环境污染物最终会通过食物链进入人体，危害人类的公共健康。

抗生素带来的环境污染问题已经成为当前的研究热点。针对环境中残留的盐酸土霉素，其降解方法主要包括物理化学方法，如臭氧催化、紫外照射等，和生物降解方法，如活性炭吸附，膜生物反应器、堆肥法等。而微生物降解因其成本低，无二次污染，程序简单等优点，被应用到很多方面。

实验室培养的盐酸土霉素降解菌已有报道，如于浩筛选出一株能降解盐酸土霉素的短波单菌属，孟应宏筛选出的假单胞菌。但尚未见到酵母菌(Cutaneotrichosporoncutaneum)降解盐酸土霉素的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌，所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌能够降解盐酸土霉素，同时对四环素类抗生素、氯霉素和铜锌离子有良好的耐受性，且具有重金属与抗生素的交叉抗性。

本发明还有一个目的在于提供一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌制成的发酵液。

本发明的另外一个目的在于提供一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌制成的应用，用于提高植物产量和降解盐酸土霉素。

本发明具体技术方案如下：

一种耐铜锌的盐酸土霉素降解菌，属于酵母菌，拉丁文名称Cutaneotrichosporoncutaneum，菌株名为DJ1。

所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌于2019年11月4号，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏号CGMCC N0.18794。

所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌的18SrDNA序列由1020bp碱基构成，其核苷酸序列如SEQUENCE LISTING4001所示。

本发明所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌从养殖废水中筛选而来，在添加微量铜锌离子和盐酸土霉素的选择培养基上连续富集培养、分离纯化，得到耐铜锌的盐酸土霉素降解菌DJ1。

所述耐铜锌的盐酸土霉素降解菌DJ1在PDA培养基上培养48后，得到的菌落呈圆形，乳白色，湿润，粘稠，易挑起。镜检下观察菌体呈椭圆形，出芽生殖。

本发明还提供了一种利用耐铜锌的盐酸土霉素降解菌制备的发酵液，所述发酵液通过以下方法制备：