[发明专利]基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法

说明书

一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个。培养的培养时间为35‑48小时，培养条件为37℃、5％CO2。然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。本发明的药物不会引起任何不良反应，患者容易接受。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法。

背景技术

脐带间充质干细胞是以人脐带血血清为主体的培养体系的脐带间充质干细胞培养扩增的方法：流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞均表达CD44、CD29，低表达CD106，不表达造血细胞表型CD14、CD34、CD45和内皮细胞表型CD31，也不表达HLA-DR：细胞倍增时间为30h，细胞周期分析表明，G0～G1期和+G2+M期所占比例分别为78.84％和11.16％。结论：应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞，培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性，为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。

脐带间充质干细胞的主要用途包括：

一、能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；

二、能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果；

三、能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。

四、能在体内或体外通过生物因子定向诱导分化为神经细胞、胰岛素分泌细胞等，从而为帕金森、糖尿病等治疗提供新的治疗方式，是目前干细胞研究的热点之一。

发明内容

本发明提供基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种基于干细胞上清收集提取鉴定分析的药物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取脐带间充质干细胞，采用完全培养基进行第一培养，然后采用无血清的DMEM/F12培养基进行培养，收集细胞培养基的上清液，得到脐带间充质干细胞上清液；

脐带间充质干细胞的接种密度为每平方厘米(1～10)×103个。

培养的培养时间为35-48小时，培养条件为37℃、5％CO2。

然后进行第二培养，第二培养的培养时间为40～60小时，培养条件为37℃、5％CO2。

所述收集脐带间充质干细胞培养基的上清液之后还包括离心、取上清、提取、鉴定、分析、滤膜过滤的步骤。

有益效果：

本发明的药物不会引起任何不良反应，患者容易接受。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例一。

脐带间充质干细胞的获取主要有组织块贴壁法与酶消化法，由于酶对细胞的损伤较大，且细胞得率较低，费用昂贵，因此大多数实验室采取了组织块贴壁法进行培养。