[发明专利]一种多基因肝癌预后分级体系的建立方法及应用

说明书

本发明公开一种多基因肝癌预后分级体系的建立方法及应用，可用于预测肝癌患者手术后生存期与复发概率，与患者的年龄、肿瘤大小无关。样本来源于浙江大学医学院某附属医院2012‑2018年共378例临床肝癌手术患者，样本经过严格质控后通过多基因定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction，qRT‑PCR)，进一步分析各基因与生存期相关性，最终筛选出与临床肝癌手术患者预后相关的高危基因，构建预后分级体系。本发明专利技术有益效果：本发明构建了一种可预测临床肝癌患者术后生存期与复发概率的预后分级体系，而与患者年龄、肿瘤大小无关。可用于肝癌手术患者术后生存期评估，辅助制定患者术后治疗方案。

技术领域

本发明涉及临床肝癌手术患者预后分级体系领域，主要是一种多基因肝癌预后分级体系的建立方法及应用。

背景技术

我国肝癌发患者数占全球的一半以上，肝癌恶性程度高，预后差，目前肝癌5年生存率仅16.8％^[1,2]。手术切除仍然是治疗肝癌的主要手段^[3]。不同肝癌患者中肿瘤存在明显异质性，因此手术切除是否可以让患者从中获益仍是一个未知数，目前发现了的一系列可用于预测个体复发和预后危险度的分级体系大多与肝癌临床特征如肝功能分级，AFP，肿瘤大小，部位相关，但由于患者个体信息复杂，且随访数据存在人为误差，大大降低了预测分级体系的可靠性。因此目前迫切需要一种简易、容易获取的客观分级体系对手术切除肝癌患者进行术后风险评估。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种多基因肝癌预后分级体系的建立方法及应用，可用于预测肝癌患者手术后生存期是否得益，与患者的年龄、肿瘤大小无关。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。一种多基因肝癌预后分级体系的建立方法，样本经过严格质控后通过多基因定量即时聚合酶链锁反应，进一步分析各基因与生存期相关性，最终筛选出与临床肝癌手术患者预后相关的高危基因，基因组合包含MKI67，AR，PLG，DNASE1L3，PTTG1，PPP1R1A，TR这7个基因，构建预后分级体系；数据经过统计学方法校验，预后分级体系经过临床样本验证，具有良好的临床预测能力。

更进一步的，检测数据来源于一个肝癌-癌旁组织配对cDNA芯片，具备经过质控的完整临床资料及随访信息，cDNA终浓度均为1000ng/ul。

更进一步的，具体构建方法如下：根据7个基因生存曲线风险比值，对样本队列通过R语言进行COX回归分析得到各个患者单基因HR值，最后加权计算得到每个患者总的HR得分；根据HR得分对临床肝癌患者分组。

本发明同时公开了一种由MKI67，AR，PLG，DNASE1L3，PTTG1，PPP1R1A，TTR这7个基因构成的基于HR分级模式的分级体系在肝癌患者中的应用。

多基因表达检测是通过构建组织cDNA芯片，在RNA表达层面对多基因进行半定量检测。基于多基因表达检测形成的多基因联合风险预后分级体系在乳腺癌中具有重要的临床应用。为了对大样本量组织进行单个或多个基因的定量检测，我们首先建立了一个包含186对癌-癌旁组织来源cDNA的分子库，并设计为384孔板cDNA阵列。我们借助该cDNA芯片进行了多个基因的表达检测，并构建了一种与患者的年龄、肿瘤大小无关的可用于预测肝癌患者术后生存期的预后分级体系。可用于肝癌手术患者术后生存期评估，辅助制定术后治疗方案。

本发明的有益效果为：本发明构建了一种可预测临床肝癌患者术后生存期与复发概率的预后分级体系，而与患者年龄、肿瘤大小无关。可用于肝癌手术患者术后生存期评估，辅助制定患者术后治疗方案。

附图说明

图1为本发明经质控的cDNA芯片进行qRT-PCR反应后的熔解曲线及扩增曲线示意图1。

图2为本发明经质控的cDNA芯片进行qRT-PCR反应后的熔解曲线及扩增曲线示意图2。