[发明专利]一种猪瘟病毒囊膜蛋白寡聚蛋白体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种猪瘟病毒囊膜蛋白寡聚蛋白体及其制备方法和应用。寡聚蛋白体包括猪瘟病毒囊膜蛋白分子和外源寡聚化结构片段，猪瘟病毒囊膜蛋白分子选自猪瘟病毒囊膜蛋白E2分子、猪瘟病毒囊膜蛋白E0分子，猪瘟病毒囊膜蛋白E2分子与外源寡聚化结构片段形成E2寡聚蛋白体，猪瘟病毒囊膜蛋白E0分子与外源寡聚化结构片段形成E0寡聚蛋白体。将E2、E0寡聚蛋白体作为疫苗抗原，不含任何猪瘟病毒的遗传物质RNA，生产和使用均安全。E2及E0寡聚蛋白体中的各囊膜蛋白保持其天然结构及生物活性，做为疫苗抗原免疫效果显著；寡聚蛋白体将抗原的多个亚单位蛋白聚合在一起，克服了亚单位蛋白疫苗的弱点，疫苗免疫原性显著提高，且抗原含量高，容易生产和纯化。

技术领域

本发明涉及生物工程及病毒疫苗技术领域，尤其涉及猪瘟病毒囊膜蛋白E2及E0寡聚蛋白体及其制备方法、包含有猪瘟病毒囊膜蛋白E2及E0寡聚蛋白体的新型疫苗，以及在制备猪瘟病毒抗体检测制剂或猪瘟病毒疫病监测制剂中的应用。

背景技术

猪瘟(Classic Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus，CSFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，目前可分为急性、亚急性、慢性和非典型猪瘟。急性猪瘟由强毒株引发，一般导致猪的高发病率和高死亡率。除引起败血症外，猪瘟病毒还可引起一系列临床表现，如妊娠母猪流产、胎儿畸形、慢性营养消耗、淋巴细胞和血小板减少等免疫系统病变，并容易继发和并发细菌或其他病毒感染。猪瘟给世界养猪业造成了巨大的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疫病名录(OIE-listeddiseases)，为须申报的(Notifiable)动物传染病，我国也将其列为一类动物传染病。

猪瘟病毒为黄病毒科瘟病毒属成员，病毒粒子呈球形，是有囊膜的单股正链RNA病毒。基因组全长12.3kb，含有一个大的开放阅读框(Open reading frame，ORF)，该阅读框编码一个含3898个氨基酸的多聚蛋白，此多聚蛋白在宿主细胞和病毒自身蛋白酶作用下，加工形成4个结构蛋白(C、E0、E1和E2)和8个非结构蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。其中囊膜糖蛋白E0和E2是两个保护性抗原蛋白，可以诱导机体产生抗猪瘟的保护性免疫抗体。

近年来，猪瘟在亚洲、欧洲、南美洲等地区呈现复发的趋势，且现代猪瘟的流行趋势发生了很大变化，呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存，隐性感染和持续感染并现，免疫失败的现象亦时有发生。这种新的流行形式给全世界养猪业提出了新的挑战，加上用传统弱毒疫苗免疫动物后，无法区分被野毒感染与主动免疫的动物(Differentiating Infectedfrom Vaccinated Animals，DIVA)，已经不能满足现代防控和根除猪瘟的要求了。因此，研制安全、高效且具有DIVA特性的新型猪瘟疫苗对于预防和控制该病具有重要意义。

虽然近年来研制的新型猪瘟疫苗具有各自的优势，但也存在一定的缺陷。如核酸疫苗诱导产生抗体的速度慢，接种剂量大，有整合和转化染色体的潜在危险；病毒活载体疫苗对人类而言，因还不完全了解病毒的自然发生及变异机制，无法控制该类病毒的未来走向；亚单位疫苗免疫原性通常要比病毒颗粒抗原差，不能提供有效保护；基因缺失疫苗通常为弱毒活苗，其长期使用可能会改变猪瘟病毒原有的生态环境和病毒群落，使猪瘟流行毒株向远离疫苗毒的方向演化，且很难达到现代防控和根除猪瘟疫病的要求。

寡聚蛋白体，也叫多聚蛋白质或多亚基蛋白体，是指由两个或两个以上亚基蛋白组成的蛋白体。与单亚基蛋白质相比，寡聚蛋白体的分子体积大，多亚基协同，能产生变构效应以利于细胞识别和功能调节，可以做为理想的疫苗抗原。

鉴于此，本发明提供一种猪瘟病毒囊膜蛋白寡聚蛋白体及其疫苗，克服传统疫苗的不足，弥补其它基因工程疫苗的缺憾，从而有效提高疫苗的免疫原性。

发明内容