[发明专利]一种宫颈细胞保存液及其制备方法和宫颈细胞保存方法

说明书

本发明涉及细胞保存技术领域，特别涉及一种宫颈细胞保存液及其制备方法和宫颈细胞保存方法。该宫颈细胞保存液按如下组分及配比制备而成：甲醇：50～70g；Tris‑HCl溶液：30～50mL；EDTA·2Na：0.5～1.5g；NaCl：0.5～1.5g；proclin950：0.001～0.01mL；Proclin300：0.001～0.01mL。本发明宫颈细胞保存液能够维持宫颈脱落细胞内及感染细胞的病毒核酸完整性，对核酸DNA提供有效保护，防止核酸降解，有利于HPV‑DNA检测。

技术领域

本发明涉及细胞保存技术领域，特别涉及一种宫颈细胞保存液及其制备方法和宫颈细胞保存方法。

背景技术

宫颈癌是对女性健康造成危害且为女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，而宫颈癌的发生是长期的过程，癌前病变为病变的可逆期。现已有无数研究结果证实HPV持续感染与宫颈癌及癌前病变密切相关，故HPV感染的早发现、早预防是阻断病变的关键。

虽然传统的巴氏涂片法具备诊断特异性高、简单易行且便宜等特点，但是灵敏度低、假阴性率高，同时还需要受过高等训练的细胞病理学家来解释其检测结果，受阅片者主观因素的影响。而直接针对病因的高灵敏度HPV-DNA/RNA检测在宫颈病变预防、筛查、诊治及随访中的优势日益显现。

目前市场上细胞保存液大都侧重于固定细胞结构，有利于保存细胞用于细胞学检测，但不能很好的适用于对细胞DNA样本的收集、储存或制备的技术要求。HPV-DNA/RNA检测对宫颈细胞保存液提出了更高的要求，不仅需要能够迅速固定白细胞、脱落上皮细胞等有检测意义的细胞，并能稀释样本中的粘液，减少对后续处理或检测的影响。现有公开专利中的细胞保存液或专用的宫颈细胞保存液不能有效保护细胞内核酸的完整性。因此，需要提供一种能够有效防止核酸降解的宫颈细胞保存液，从而有利于HPV-DNA/RNA检测。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种宫颈细胞保存液及其制备方法和宫颈细胞保存方法。该宫颈细胞保存液能够有效防止核酸降解，有利于HPV-DNA/RNA检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种宫颈细胞保存液，按如下组分及配比制备而成：

作为优选，该宫颈细胞保存液按如下组分及配比制备而成：

优选地，该宫颈细胞保存液按如下组分及配比制备而成：

上述细胞保存液组分中固定剂为甲醇，能够快速固定保存样本中白细胞、脱落上皮细胞等用于后续检测的细胞，同时助于胞内核酸的完整保存；

上述渗透压维持剂为NaCl溶液；

上述金属螯合剂为乙二胺四乙酸二钠，在该保存液中是抗凝聚试剂，用于避免细胞堆积；

上述pH缓冲剂为Tris-HCl缓冲液，能够维持细胞保存液pH环境稳定；

上述非离子去污剂为Tritonx-100，利于降低样本中黏液造成的干扰；

上述防腐保鲜剂为Proclin950和Proclin300的混合物，可以有效地抑制细菌、真菌、酵母菌等微生物的生长，有利于延长保存液稳定时间。

作为优选，Tris-HCl溶液的浓度为1.0～2.0M。

优选地，Tris-HCl溶液的浓度为1.5M。

作为优选，Tris-HCl溶液的pH值为8.0～9.0。

优选地，Tris-HCl溶液的pH值为8.5。