[发明专利]一种用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体、偶联蛋白、抗原表位肽以及杂交瘤细胞株

说明书

本发明涉及一种用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体、偶联蛋白、抗原表位肽以及杂交瘤细胞株，属于免疫学技术领域。本发明中选择以NRQKPVVDHSVRINS为核心的多肽序列作为抗原表位肽制备单克隆抗体，为提高抗原表位肽的免疫效果，在前述的核心序列N端或者C端增加至少1个同时不超过10个氨基酸，使其N端或者C端为含有巯基的氨基酸；将抗原表位肽上的巯基通过偶联剂与载体蛋白上的氨基偶联获得人CD117抗原，用其对于动物进行免疫，获得人CD117单克隆抗体。本发明中为国内生产人CD117抗体提供了一个新的途径，获得单克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度，且价格便宜。

技术领域

本发明涉及一种用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体、偶联蛋白、抗原表位肽以及杂交瘤细胞株，属于免疫学技术领域。

背景技术

CD117蛋白是一种分子量为145kDa的糖基化磷蛋白，有1个跨膜区，氨基端位于细胞膜外侧，羧基端位于细胞质膜内侧。CD117蛋白具有5个免疫球蛋白样结构域和一个III型酪氨酸激酶生长因子结构域，在调节细胞存活和增殖、造血、干细胞维持、肥大细胞发育、迁移和功能以及黑色素生成等方面发挥重要作用。

CD117蛋白在造血干细胞、黑色素细胞、肥大细胞、Cajal细胞、生殖细胞、皮肤基底细胞和乳腺导管上皮等正常组织细胞中表达，在胃肠道间质瘤(GIST)、肺小细胞癌和黑色素瘤、肥大细胞疾病、急性髓系白血病(AML)、和尤文氏肉瘤等异常组织中表达。在临床中常用于胃肠道间质瘤(85-95％阳性率)的诊断，也可与CD34联合使用。近年来，CD117蛋白作为GIST的特异性免疫组化标志物，可以用于靶点用药(格列卫)指导治疗GIST患者。

目前临床上常用免疫组织化学(IHC)的免疫学方法来检测肿瘤细胞中蛋白的表达状况，特异性识别CD117蛋白的单克隆抗体对IHC检测CD117表达水平具有重要的意义。免疫学方法(IHC)检测的核心为与CD117蛋白特异性结合的单克隆抗体，其特异性、灵敏度以及稳定性的优劣直接决定整个检测的可靠性。国内使用的抗CD117单克隆抗体多来源于国外进口抗体(克隆号：YR145，EP10，A4502)，造价高昂；为获得与进口试剂效果相当或者优异的抗CD117单克隆抗体，同时减轻病患负担，降低诊断及治疗费用，研制出一种具备临床应用的抗CD117单克隆抗体具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体，其具有较高的特异性和灵敏度。

本发明还提供了一种人CD117偶联蛋白，其能够作为抗原用于制备上述的用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体。

本发明还提供了一种抗原表位肽，其能够用于制备上述的人CD117偶联蛋白。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株能够生产上述的用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于检测人CD117蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体是由人CD117单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述人CD117单克隆抗体杂交瘤细胞株是以人CD117偶联蛋白为抗原制备而成，所述人CD117偶联蛋白是由抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成；所述抗原表位肽的氨基酸序列为x-NRQKPVVDHSVRINS-y，所述x为0-10个氨基酸构成的辅助序列，所述y为0-10个氨基酸构成的辅助序列。