[发明专利]一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺

说明书

一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺，包括以下步骤：(1)调节孕马血浆的pH至3.0‑4.0，固液分离，滤液浓缩，加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为30‑55％(v/v)，再固液分离后，滤液加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为70‑90％(v/v)，获得的沉淀干燥，即为PMSG粗品；(2)往PMSG粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分离后，沉淀物加醇类物质，获得的沉淀干燥，即为PMSG中间品；(3)PMSG中间品加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液二次加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液加入醇类物质，获得沉淀干燥，得PMSG精制品。

技术领域

本发明属于孕马血清促性腺激素生产技术领域，具体涉及一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺。

背景技术

孕马血清促性腺激素(简称PMSG)是孕中母马尿囊绒毛膜细胞分泌的糖蛋白类促性腺激素。PMSG具有类似促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的双重活性，但以FSH的作用为主，具有明显的促卵泡发育作用；同时，也有一定的促排卵和黄体形成的功能，对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。实践上，PMSG可以调控母畜同期发情，实现可控同步批次化生产，并缩短配种时间、降低不孕概率、提高繁殖效率。目前，PMSG已经广泛应用于动物的诱导发情、同期发情，超数排卵或增加排卵率；同时对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也有良好的疗效。

应用范围的扩大和规模化养殖的普及导致市场对PMSG的需求量大幅上升。尽管国际和国内市场需求很大，但我国的PMSG生产工艺还很落后，基本上沿用传统的蛋白质分离技术，如蒙马(天津)生物科技有限公司申请的专利《一种孕马血清促性腺激素的提取分离系统》(CN207294655U)公开的提取方法大致为：孕马血清偏磷酸沉淀-加入硫酸铵-低浓度乙醇沉淀-高浓度乙醇沉淀-获得PMSG粗品，以及中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所申请的专利《兽用血促性素生产工艺及产品》(CN1872088B)公开的提取方法为：孕马血清稀释-加硫酸铵并调pH6.0-7.0-过滤后加偏磷酸沉淀-上清中空纤维浓缩-低浓度乙醇沉淀-上清高浓度乙醇沉淀-获得PMSG粗品。上述传统方法获得的产物均为PMSG粗品，效价较低，不足300IU/mg，国家药典标准≥100IU/mg，而欧洲药典标准为≥1000IU/mg，PMSG粗品的效价与欧洲药典标准相差甚远。纯度低的PMSG制品对受用动物也会产生一定危害，除此之外，上述提取方法还要存在生产过程回收率低、质量稳定性差，规模化生产技术就更不尽人如意，无法满足要求，也严重影响到经济效益和社会效益的实现。

发明内容

本发明针对现有技术中PMSG制备过程中存在效价低、质量差的缺陷，提供一种PMSG的制备工艺，获得效价≥1500IU/mg的高纯度PMSG。

本发明的以上目的通过以下技术方案来实现：

一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括以下步骤：

(1)孕马血清促性腺激素粗品制备：调节孕马血浆的pH至3.0-4.0，固液分离，滤液浓缩后，加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为30-55％(v/v)，再固液分离后，滤液加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为70-90％(v/v)，固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素粗品；

(2)孕马血清促性腺激素中间品制备：往孕马血清促性腺激素粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分离后，沉淀物加醇类物质，固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素中间品；

(3)孕马血清促性腺激素精制品制备：孕马血清促性腺激素中间品加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液二次加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液加入醇类物质，获得的沉淀干燥，得孕马血清促性腺激素精制品。