[发明专利]一种穿膜肽-前B细胞白血病转录因子1融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种穿膜肽‑前B细胞白血病转录因子1融合蛋白及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域，通过将CPP与PBX1融合表达的方式，利用CPP能携带外源蛋白进入细胞的穿膜特性，将PBX1转录因子高效的带入干细胞内，从而维持干细胞的自我更新能力，促进其增殖并延缓其衰老，为体外大规模制备干细胞提供一种新的解决方案。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种穿膜肽-前B细胞白血病转录因子1融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

干细胞具有自我更新与多向分化的潜能,是再生医学的核心组成部分,已被应用于造血系统疾病、中枢神经系统疾病及免疫系统疾病等多种疾病的治疗。如同其它体细胞一样，干细胞也会衰老，影响其增殖、分化及组织修复能力。一方面，干细胞的衰老被认为是机体衰老的重要驱动力，可引起机体多种组织器官的功能障碍；另一方面，干细胞的在体外大量扩增时产生的复制性衰老限制了其在临床治疗中的应用范围。干细胞分为胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞。研究发现，前B细胞白血病转录因子1(PBX1)可通过激活Nanog转录以增强胚胎干细胞的自我更新能力(Chan K K,Zhang J,Chia N Y,et al.KLF4and PBX1 directly regulate NANOG expression in human embryonic stem cells[J].Stem Cells,2009,27(9):2114-25.)；我们课题组发现，PBX1可通过激活PI3K/AKT信号通路，促进毛囊间充质干细胞的增殖和自我更新，同时促进毛囊间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞(Jiang Y,Liu F,Zou F,et al.PBX homeobox 1 enhances hair folliclemesenchymal stem cell proliferation and reprogramming through activation ofthe AKT/glycogen synthase kinase signaling pathway and suppression ofapoptosis[J].Stem Cell Res Ther,2019,10(1):268.)。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种穿膜肽-前B细胞白血病转录因子1融合蛋白及其制备方法和应用，通过将CPP与PBX1融合表达的方式，利用CPP能携带外源蛋白进入细胞的穿膜特性，将PBX1转录因子高效的带入干细胞内，从而维持干细胞的自我更新能力，促进增殖并延缓衰老，为体外大规模制备干细胞提供一种新的解决方案。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种穿膜肽-前B细胞白血病转录因子1融合蛋白(CPP-PBX1)，所述融合蛋白的结构为：N端-纯化标签(Tag)-酶切位点(Site)-细胞穿膜肽(CPP)-连接肽(Linker)-前B细胞白血病转录因子1(PBX1)-C端。

优选的，所述纯化标签包括His6、GST、Myc、MBP、NusA或SUMO。

优选的，所述酶切位点包括：Enterokinase，Thrombin，Factor Xa，TEV protease，PreScission，HRV 3C Protease，Furin或SUMO Protease，所述Enterokinase的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；Thrombin的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；Factor Xa的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示；TEV protease的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；PreScission的酶切位点氨基酸序列如SEQ IDNO.6所示；HRV 3C Protease的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；Furin的酶切位点氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；SUMO Protease的酶切位点为SUMO的三级结构。