[发明专利]重组表达载体系统、重组工程菌及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种重组表达载体系统，其特征在于：所述重组表达载体系统至少包含两个重组表达载体，每个所述重组表达载体上含有一个或多个核酸表达盒，每个核酸表达盒包含目的基因，以及与目的基因可操作地连接的启动子，每个所述目的基因分别独立选自HPV6 L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1、HPV31 L1、HPV33 L1、HPV35 L1、HPV39 L1、HPV45 L1、HPV51L1、HPV52 L1、HPV53 L1、HPV56 L1、HPV58 L1、HPV59 L1、HPV66 L1或HPV68 L1中的一种，且所有目的基因都互不相同。

2.根据权利要求1所述的重组表达载体系统，其特征在于：每个所述重组表达载体还包含一个或者多个含有选择物标记基因的核酸表达盒。

3.一种重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌包含如权利要求1所述的重组表达载体系统。

4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌是酵母，优选地，所述酵母选自酿酒酵母、多形汉逊酵母、巴斯德毕赤酵母、脆壁克鲁维氏酵母、乳酸克鲁维氏酵母、或栗酒裂殖酵母中的任一种或多种。

5.一种制备如权利要求1或2所述的重组表达载体系统的方法，所述方法为通过改造原始质粒获得，具体包括以下步骤：将目的基因的启动子和终止序列分别替换两个原始质粒的启动子和终止序列；再将目的基因分别插入启动子和终止序列之间。

6.据权利要求5所述的重组表达载体系统的制备方法，所述方法为：将质粒pPICZB改造获得，具体包括以下步骤：

(1)质粒pMMZ的构建：采用第一启动子MOX插入片段和第一终止序列AOXTT分别替换质粒中的启动子和终止序列，获得质粒pMOXZ-1；采用第二启动子MOX插入片段和第二终止序列AOXTT分别替换质粒中的启动子和终止序列，获得质粒pMOXZ-2；连接质粒pMOXZ-1和质粒pMOXZ-2；

(2)替换质粒上的选择标记物基因，获得与步骤(1)中的质粒具有不同选择标记物基因的质粒；

(3)将目的基因分别插入步骤(1)和步骤(2)构建的质粒中获得重组表达载体。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体系统的制备方法，其特征在于：所述方法还包括以下特征中的至少一种：

a.所述目的基因分别独立选自HPV6 L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1、HPV31 L1、HPV33 L1、HPV35 L1、HPV39 L1、HPV45 L1、HPV51 L1、HPV52 L1、HPV53 L1、HPV56 L1、HPV58L1、HPV59 L1、HPV66 L1或HPV68 L1中的一种；

b.所述第一启动子MOX插入片段为采用SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示序列为引物，汉逊酵母基因组DNA为模板，扩增得到；

c.所述第一终止序列AOXTT采用SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11所示序列为引物，pPICZB质粒为模板，扩增得到；

d.所述第二启动子MOX插入片段为采用SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9所示序列为引物，汉逊酵母基因组DNA为模板，扩增得到；

e.所述第二终止序列AOXTT为采用SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12所示序列为引物，pPICZB质粒为模板，扩增得到。

8.如权利要求3所述的重组工程菌的制备方法，所述方法为将如权利要求1或2所述的重组表达载体系统转化至工程菌中获得。

9.如权利要求1或2重组表达载体系统或权利要求3或4所述的重组工程菌在制备HPVL1蛋白中的用途。