[发明专利]一株强耐酸性乳酸杆菌菌株及其筛选、发酵工艺

说明书

本发明提供了一株强耐酸性乳酸杆菌菌株PBIL1‑039及其筛选、发酵工艺。所述乳酸杆菌菌株PBIL1‑039分离自甘肃定西市通渭县农家自发调味菜浆水，经鉴定分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2019750，保藏时间为2019年9月25日。本发明提供的强耐酸性植物乳杆菌耐酸性强，在模拟胃肠道环境中能够耐受pH2.0酸度和0.3％胆盐浓度的影响，反应2h后发酵液存活率高达63.3％和20.1％，显著高于市售同类菌株产品的耐酸能力。菌粉在保持强耐酸特性的条件下，冻干粉活菌数可保持在2000亿/g。

技术领域

本发明属于益生菌制品制备技术领域，尤其涉及一株强耐酸性乳酸杆菌菌株及其筛选、发酵工艺。

背景技术

益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效，从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性微生物的总称。人体肠道中栖息着数量巨大的微生物群，它们的构成和活动影响着宿主的免疫、黏膜的发育及营养与药物的代谢。目前，益生菌制剂在食品及保健品领域多以粉剂、片剂、硬胶囊、颗粒剂等形式存在。

我国卫生部公布的《可用于生产普通食品的菌种名单》中的菌种中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是其中最重要的种类之一。其作为人体胃肠道的正常菌群，在肠道中能调节微生态平衡，代谢过程中能产生多种抑菌物质，对增强人体免疫能力，缓解乳糖不耐症、降低胆固醇水平及抑制肿瘤细胞的形成等都极有一定的作用。但活性乳酸菌要进入肠道发挥作用，首先经受住人体胃肠道微环境的影响。活性乳酸菌能否顺利通过胃液，盐酸的耐受能力强弱是一个关键因素。胃液的pH因饮食结构的不同有很大的波动，通常情况下pH为3.0左右，但空腹或食用酸性食品时pH可达2.0，而食物的通过时间一般为1-2h。除胃酸影响菌体的存活外，肠道胆盐对活菌也有很强的抑制作用，胆盐可改变菌体外膜的通透性，对乳酸菌起到抑制杀菌作用，人体小肠内胆汁盐含量为0.3-3g/kg，尽管人体肠道胆盐浓度变化较大，但通常认为平均胆盐浓度为0.3％。因个人生活及饮食习惯的差异性，益生菌产品在实际应用中，难以保证人体胃酸pH均在3.0以上，因此筛选真正能够抵抗较强的酸性环境和人体胆盐浓度的益生菌菌株，并实现其工业化生产，是保证其在肠道中存活和发挥其功效的基本手段。除最基本的菌株筛选之外，诱导抗性菌株、保护剂处理、微胶囊包埋技术等都能提高菌粉在人体胃肠道环境中的耐受性。但研究发现，因工业化生产的原料、工艺、处理等的因素的影响，具有较强耐受性的菌株经工业化生产后所得成品很难保持其原有特性，导致乳酸菌成品在到达肠道之前失去活性，丧失其应有的益生效果。

基于目前益生菌的生产及使用现状，本专利从菌株来源出发，筛选能够抵御宿主胃液、胆盐胁迫的益生菌菌株，研究保持其特性的工业化发酵工艺及可操作的菌粉冻干包埋工艺，这对益生菌类在食品、保健品及医药用品的使用上具有重要意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种强耐酸性乳酸菌，在实验室筛选获得具有较强耐酸耐胆盐特性的乳酸菌菌株，通过抑菌活性检测，进一步筛选具有强耐酸特性的菌株，以满足实际引用的需求。同时根据目前工业和发酵的特点，提供一种直投式乳酸杆菌的工业化大生产发酵方法，以及一种含有所述强耐酸性乳酸菌的冻干粉以及冻干粉的冻干工艺。

作为本发明的目的之一，在于提供一株强耐酸性乳酸杆菌菌株，所述乳酸杆菌菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌株PBIL1-039，保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019750，保藏时间为2019年9月25日。

本发明提供的植物乳酸杆菌菌种PBIL1-039，分离自甘肃定西市通渭县农家自发调味菜浆水。

作为本发明的目的之二，在于提供一种强耐酸性乳酸杆菌菌株的筛选方法，包括如下步骤：